DNA聚丙烯酰胺电泳Marker条带不亮
来源:学生作业帮助网 编辑:作业帮 时间:2024/05/22 00:33:59
加的是6*的loadingbuffer,不是说要加6倍的缓冲液,而是说加5微升的DNA样品,需要加1微升的6*上样缓冲液,这样6*的缓冲液被稀释成1*的了,1*才是缓冲液的工作浓度.不懂的话再追问啊
是电泳结束后,把分离胶切下来放在平皿里,用考马斯亮蓝染液(0.05%)染色过夜,之后换脱色液(醋酸:乙醇:水1:4:5)泡一段时间就能看到清晰的条带了~
可以把含蛋白质的聚丙烯酰胺胶分别挖下来,做胶内酶解(用测序级trypsin),使蛋白质变成肽端,再采用乙腈等化学溶剂将其萃取出来,除盐,冻干.用碳酸氢铵复溶,上ESI-LTQ质谱,测每段肽的序列,然后
需要准备的有:蒸馏水30%丙烯酰胺/双丙烯酰胺Tris-Hcl(浓缩胶和分离胶的PH不一样)10%SDS10%APTEMED变性剂是SDS我们用的是垂直电泳,水平电泳我也不是很清楚.
不能1.RNA不规则,有单链,也有自体形成的回型2.就算是变性后,也是单链.而DNAmarker都是双链,变性的机理和RNA不一样.还是使用RNAmarke
两者原因,可能是PCR体系没设计好,或者是胶没制好,跑电泳时注意保持电流恒定再问:多谢指教!跑电泳时我用的是恒功率,这个影响会很大吗?最近在做SSR标记有点迷茫!
中间的是RNA
首先你要弄清楚你的阳性对照条带的准确位置.从你的第一张图看来,你的阳性对照有两个条带,你得根据引物确定扩增产物长度,确定哪个条带是正确的PCR产物.对第一张图还有一种解释就是你用的引物形成了引物二聚体
Tris-Gly与TAE、TBE两者的离子强度不同,用来跑DNA可能不行三磷酸腺苷(站内联系TA)补充,你跑native或者EMSA胶一类的,可以用TBE跑蛋白或者蛋白-核酸复合体yaoyl0679(
是loadingbuffer出了问题.和样本混匀后,loadingbuffer的密度应该大于电泳液,加样后很快沉到孔的底部,这时迅速加电压,就不会扩散了.
样品问题吧,maker跑的好好的啊
质粒DNA电泳会有三条带,最远的是线形DNA(lDNA):质粒的两条链均断裂;线性分子;中间的是开环DNA(ocDNA):质粒的一条链断裂;松弛的环状分子;共价闭合环状DNA(cccDNA):质粒的两
基因组DNA会在你抽提过程中发生断裂,形成几十至几百kb的大片段.如果你跑的是比较浓的胶的话,无法区分不同大小的DNA,所以看起来像是一条带.你可以配点0.6%的胶加lamdahindIIImarke
我也在找这道题的答案.以下是我搜到的,还没整理,你简化一下应该能用哈在不连续PAGE电泳中的三大物理效应:1、样品浓缩效应1)凝胶孔径不连续性:在3层凝胶中样品胶及浓缩胶为大孔径胶,在2层凝胶中样品/
DNA电泳一般使用的都是琼脂糖凝胶电泳,电泳的驱动力靠DNA骨架本身的负电荷.蛋白质电泳(一般指SDS-PAGE)一般使用的都是聚丙烯酰胺凝胶电泳,电泳的驱动力靠与蛋白质结合的SDS上所携带的负电荷.
多大浓度的胶?加样孔在上面还是下面?marker多大,尤其最亮那条带是多少?另外,marker好像是在最右边啊.再问:0.8的胶。写错了,从左向右。marker最右边。加样孔在上面。只求能分析清楚每个
marker能看到吗?marker很清楚,电泳就没问题.说明没有DNA.可能提取失败,沉淀也许是盐.测测浓度吧,应该很低.看看提取程序是不是有问题.
电泳成像体系:凝胶是否正常,是否添加EB(溴化乙啶)或EB是否降解了,上样时是否样品大量泄露,凝胶成像系统能否正常工作.由于,你的母液DNA相当于正对照,该正对照有正常的显色结果,这表明电泳成像体系运
图2是样品有少量降解,并且有RNA污染的.你的顶端有清晰条带说明降解较少,底端较亮说明RNA污染严重.你说一共有800ug,指的是你提的DNA吗,那么你是如何定量的,还有,你的样品是用来干什么用的.可