如果提取的DNA产量较低,分析原因并提出解决办法
来源:学生作业帮助网 编辑:作业帮 时间:2024/05/17 02:58:00
(1).浓盐法(2).阴离子去污剂法:(3).苯酚抽提法:(4).水抽提法:(5)磁珠法,目前最快最间简洁的方法,用磁分离技术,详情请看惠尔公司提供的磁珠分离方法
解题思路:计算解题过程:其四种碱基的比例是鸟嘌呤与胞嘧啶之和占全部碱基总和的百分之46,在DNA中G=C,同时每一条链上G+C的比值等于整个DNA上的比值,由此可以知道在DNA的一条链上G+C=46%
(a)\x05磁珠法中的细胞裂解液是一种蛋白变性剂,可使动植物的细胞裂解,并使与DNA结合的蛋白质变性,DNA游离释放,磁球可以特异地吸附DNA,通过洗涤,去除DNA以外的RNA、蛋白质等杂质,再因洗
a)磁珠法中的细胞裂解液是一种蛋白变性剂,可使动植物的细胞裂解,并使与DNA结合的蛋白质变性,DNA游离释放,磁球可以特异地吸附DNA,通过洗涤,去除DNA以外的RNA、蛋白质等杂质,再因洗脱液解离吸
制备鸡血细胞液沉淀后去上清——放入清水中吸水涨破——过滤去细胞碎片留虑液——加2MOL/LNaCl——使DNA析出——过滤去滤液——2mol/LNaCl再溶解——过滤去多余DNA——加体积分数95%冷
你说的是粗提取吧?注意事项:first实验材料不能用猪血代替鸡血,因为哺乳动物成熟红细胞木细胞核儿~~second制备鸡血细胞液时,注意向鸡血中加入柠檬酸钠,防止血液凝固3搅拌时沿一个方向搅拌4使细胞
是——金贵.
DNA是否容易降解和溶解DNA的溶剂有关,如果用水溶解,存在一定的概率,水可能为酸性,这样就容易引起DNA降解.所以一般用TE溶解比较好,除非用TE会影响影响后续试验.比如QiagenDNeasyki
ElectroanalyticalChemistry2007年2.58Chromatographia2007年1.145JournalofAnalyticalToxicology2007年2.068J
取出少量样品用特异性酶切,检查大分子是否还在(uv或者电泳),确认.用紫外分光光度计扫描,计算A260/A280之比值,如果大于1.8说明RNA污染,如果小于1.8有蛋白污染.(原理这里不讲了太费时间
如果是植物DNA的话就表明有酚类物质还有蛋白质,会影响OD值偏小,黄表明有色素
用不同浓度的氯化钠根据蛋白质和DNA在其中溶解度不同,析出DNA.DNA鉴定二苯胺沸水浴加热蓝色
质粒DNA提取一般用沸水浴法和碱裂解法,现在一般都采用碱裂解法,并有试剂盒可用,它主要是将细胞内的环状质粒提取出来,一般需要用SDS裂解,RNA酶降解,然后过柱,再进行洗脱.过程比较简单.而基因组DN
简单一点的,直接沸水煮一下;CTAB裂解法,酚氯仿抽提等,很多种
从血液中
提取的时候饱和酚,氯仿需要定量,这些可以去蛋白.去除RNA污染,RNA酶活性,定量.凝胶电泳,试剂最好是即用型的,因为有些东西放久了会长菌.然后是染料的热稳定性和灵敏度.
可能氧化过程温度过高,造成碳链断裂氧化
请查找CTAB法,或者玻璃珠法,还可以咨询试剂公司,现在的商业化产品线很丰富了
很有可能有蛋白,或许其它的东东,你最好测260nm.280nm230nm处od,看看他们的比值,才好判断到底是什么被污染了.因为蛋白的吸收峰是280nm.纯净的样品,比值大于1.8(DNA)或者2.0
真菌的细胞成分和植物是有差别的,这种专一性的植物DNA提取试剂盒不一定能提好真菌的DNA.如果有条件你最好是买专一性的真菌DNA提取试剂盒.不过植物DNA提取的CTAB法确实可以适用于真菌的DNA提取