如何实现真核生物基因在大肠杆菌中的高效表达与纯化

真核生物基因为不连续基因,即基因里面既还有外显子序列,又含有内孩子序列!一般情况下,外显子是编码蛋白质的,内含子是不编码蛋白质的,但是在转录起始时,外显子和内含子都是转录的,合成的前体称之为核不均一R

一般程序如下：获得目的基因－准备表达载体－将目的基因插入表达载体中（测序验证）－转化表达宿主菌－诱导靶蛋白的表达－表达蛋白的分析－扩增、纯化、进一步检测.[主要试剂主要试剂]主要试剂1、LB培养基.2

真核生物基因表达的调控远比原核生物复杂,可以发生在DNA水平、转录水平、转录后的修饰、翻译水平和翻译后的修饰等多种不同层次（图真核生物基因表达中可能的调控环节）.但是,最经济、最主要的调控环节仍然是在

真核基因是可以在大肠杆菌中表达的.比如现在美国的公司用在大肠杆菌中导入人的胰岛素基因,使其表达,合成胰岛素.原理很简单1.表达载体要有大肠杆菌能够识别的启动子、SD序列就行,就好像是一段大肠杆菌本身的

如果是分泌蛋白,可以从培养上清中纯化.　　如果是胞内蛋白,最好在蛋白上接一个TAG,比如FLAG-TAG,然后用FLAG的抗体进行亲和纯化.再问：谢谢您的回答请问有没有具体的步骤包括用的试剂和具体每步

给你按照层次说吧：DNA分子的胞嘧啶甲基化修饰,DNA分子的断裂重排,以及复制（B细胞发育）染色质的失活（X染色体的失活）

由于自然界中所有生物共用一套遗传密码子，因此一种生物的基因能在另一种生物体内表达．如大肠杆菌细胞内可表达人胰岛素基因而产生胰岛素．故选：B．

都是原核生物

原核与真核生物基因结构都包括编码区和非编码区.但是原核生物的编码区是连续的,全部都可以转录出mRNA,编码出蛋白质.而真核基因的编码区是不连续的,又分为外显子和内含子,外显子能够转录出mRNA,编码出

1.表达载体要有合适的启动子、SD序列等.2.去掉内含子.一般用cDNA.不过真核生物在大肠杆菌中表达会存在无法对翻译好的蛋白质进行修饰的问题,这样使得这些蛋白质不具有活性

现在有很多商品化的原核表达载体,比如pET系列,含有原核启动子,终止子相同,不需要考虑SD序列,载体启动子中都有了.将真核基因编码框（CDS）序列重组进载体,转化大肠杆菌就可以表达了.表达产物没有糖基

用该mRNA做模板反转录出cDNA将cDNA导入大肠杆菌中然后应用中心法则DNA转录出新mRNA新mRna翻译出蛋白质

真核细胞与原核细胞的主要区别是：①真核细胞具有由染色体、核仁、核液、双层核膜等构成的细胞核,原核细胞无核膜、核仁,故无真正的细胞核,仅有由核酸集中组成的拟核.②真核细胞的转录在细胞核中进行,蛋白质的合

若是高中阶段,下面这句话就差不多够用了吧.相同点：原核生物和真核生物的基因组成大体上都分为编码区和非编码区；不同点：原核生物的基因编码区是连续的,而真核生物的基因编码区是不连续的,分为内含子和外显子.

在细胞核内进行,原料（游离的核糖核苷酸）通过核孔由细胞质进入核内,与解旋后的DNA单链（模板）在RNA聚合酶的催化作用下,遵循碱基互补配对原则链接为单链的mRNA(信使RNA),再通过核孔离开细胞核.

遗传背景清楚;目标基因表达水平高;表达系统成熟完善;易于培养（培养方法简单、生长快、培养周期短、抗污染能力强）、成本低;被美国FDA批准为安全的基因工程受体生物.缺点：表达产物缺少饭以后的修饰（如糖基

基因工程所用大肠杆菌表达真核基因都是cDNA序列,也就是没有内含子的.最大的困难在于有很多真核基因表达的蛋白翻译后修饰.大肠杆菌内没有特定的分子伴娘,没有磷酸化修饰酶等等,往往造成得到的蛋白没有活性.

一.转录起始的选择在真核生物中同一个基因由于转录起始的不同可以产生不同类型的酶.例如酵母蔗糖酶基因以一种分散的多基因家族存在,有6个基因（Suc1~5,7）位于不同的染色体上.每一个基因都可以转录合成

基因组水平,转录水平,转录后水平,翻译水平,翻译后水平

人环状双链DNA,长16569bp,编码13个呼吸链复合体亚基复合体一7个（ND1,2,3,4L,4,5,6）,复合体三C0X1,COX2,COX3,四cytb,五ATP8,ATP6,2个rRNA,2