变性凝胶电泳跑出的条带底部发黄

我也遇到过这种问题,个人觉得可能是目的基因的定量引物不好,还有就是要优化PCR条件!

变性了有利于去除蛋白的非特异性吧,

当然不一定,比如说你的目的基因的copynumber高或者PCR的效率高都会使得beta-actin的条带不如目的基因的条带亮

存在两种可能性,第一,引物设计错误,可以将引物和参考序列进行拼接后看看能不能顺利拼接,以及拼接之后的目的片段长度；第二,可能是非特异扩增,这个时侯如果确定引物位置没有问题,可以调整退火温度,以及PCR

可能是水污染了,另外还有你操作及操作环境的原因.建议ddH2O灭菌后分装到2ml离心管放入-20°备用,每次用一管如果容易污染的话,建议你到超净台中操作PCR过程

1、PCR体系中存在污染2、电泳槽中电泳缓冲液不净3、电压不稳定4、如果PCR的模板是经过酒精提取的质粒等相关DNA,则酒精没有除净5、退火时间过长或过短,延伸时间过短等以上是条带与你所要的目的基因的

什么是不清楚?如果有拖带说明你电压太高了.100V跑吧如果是太淡看不清说明你点样的量不够或者PCR扩增出的浓度不高

需要准备的有：蒸馏水30％丙烯酰胺/双丙烯酰胺Tris-Hcl（浓缩胶和分离胶的PH不一样）10％SDS10％APTEMED变性剂是SDS我们用的是垂直电泳,水平电泳我也不是很清楚.

两者原因,可能是PCR体系没设计好,或者是胶没制好,跑电泳时注意保持电流恒定再问：多谢指教！跑电泳时我用的是恒功率，这个影响会很大吗？最近在做SSR标记有点迷茫！

非变性凝胶里面没加变性剂,一般是SDS.非变性胶跑出来的蛋白能保持其活性一般用做功能试验,如EMSA.由于没有变性剂的原因非变性胶电泳时除了与蛋白分子量有关也会受都电荷的影响,因此对蛋白等电点的确定和

1、内参没有被扩增出来2、电泳时内参没加loadingbuffer或染料

变性:是指蛋白质被SDS变性.变性后,不同蛋白质的荷质比相同,在电泳的涌动速度只跟分子量成正相关.pAGE：既然浓度已经决定了那么凝胶形成的孔径也就固定不变了.电泳中大分子跑的慢,小分子跑得快因此蛋白

实验步骤：凝胶的制备：1、清洗干净两块玻璃板,晾干后按要求装配好垂直电泳板,两块玻璃板的两侧及底部用1%的琼脂糖封边,防止封闭不严而使聚丙烯酰胺液漏出.2、将装好的玻璃电泳板倾斜成45～60℃角.把玻

需要用变性聚丙烯酰胺凝胶电泳,一般是加入SDS,有多条肽链的蛋白质由于变性彼此分离,又因为不同的分子量在凝胶的迁移速度不同,因此形成不同的条带.

变性电泳buffer里面含尿素等变性剂pcr产物dna双链会解离成为单链非变性电泳不会解链dna以双链形式电泳

不一样,两者有一部分成份是相同的,如指示剂溴酚蓝,和增加比重的蔗糖.对于SDS－PAGE的缓冲液,它还含有一定比例的SDS和强还原剂（巯基乙醇或者DTT）,因为SDS－PAGE中蛋白与SDS结合变性是

有两个可能,胶没混匀,或者是APS不是新配的,建议用新配APS溶液试试.再问：谢谢你的回答，我胶应该混匀了，几次了不会每次都没混匀啊。APS是新配的啊。我想请问，你感觉是应该整个溶液都一起凝，还是我这

首先确认你的LoadingBuffer中的溴酚蓝有没有跑出去.另外,不知你是跑的场强多大,如果是Mini胶的话216V,跑一个半小时肯定是跑出去了.

首先,检查你的agarosegel浓度.一般以0.8%为标准（0.8g琼脂糖+100mlTEbuffer）.如果你的目标片段较小（小于100bp）,请适当提高凝胶浓度（1.2%-1.5%）.其次,如果

greenview没用过,只用过EB.我不在甲醛胶里加EB,好像那样背景比较高.我都是在变性RNA时在RNA loading buffer里加EB,胶上没什么背景.你先试一下看看吧