为什么提取植物DNA要用70%乙醇洗涤沉淀
来源:学生作业帮助网 编辑:作业帮 时间:2024/05/15 09:02:43
植物组织提取基因组DNA 一、材料 幼嫩叶子. 二、设备 移液器,冷冻高速离心机,台式高速离心机,水浴锅,陶瓷研钵,50ml离心管(有盖)及5ml和1.5ml离心管,弯成钩状的小玻棒. 三、
通过跑胶看看提取的DNA的长度,有没有很多断裂(跑胶后表现为拖尾严重),以及浓度(条带亮不亮),有没有RNA污染(表现为100bp一下还有一团一团的条带)
通常采用机械研磨的方法破碎植物的组织和细胞,由于植物细胞匀浆含有多种酶类(尤其是氧化酶类)对DNA的抽提产生不利的影响,在抽提缓冲液中需加入抗氧化剂或强还原剂(如巯基乙醇)以降低这些酶类的活性.在液氮
你说的那个一般用冷的酒精同样可以达到这种效果,目的是降低DNA的溶解度,使DNA析出
一般操作问题只会影响到浓度高低,如果根本没有,那可能试剂有问题,试剂配置?酸碱度?严格按照要求步骤来一遍.还有一步细节,分层后吸上清液时宁可少吸也不要吸到下层有机溶剂,否则Dna肯定没了
(1)可以的,液氮冷冻更容易破碎细胞壁释放DNA,但是不冷冻也没关系的,提取的DNA量即使少点也足够满足试验要求.(2)-20度足够保存,用一年以上都没问题,超低温保存时间当然更长,但是切忌反复冻融,
干燥的叶片和湿润的叶片提取NDA方法是一样的.1.将叶子剪碎,放入研钵中然后加入液氮快速研磨至粉末状,然后用DNA提取液倒入研钵再研磨,再是离心.后面不同实验不同方法了.再问:好的谢谢还有就是研钵没有
抽提时应缓慢摇匀,不能太用力,时间要适当长一点.离心后吸取上清要慢,枪头最好用蓝枪头或是剪过的黄枪头,注意千万不能触到蛋白膜.原因就是DNA链容易断裂,所以要轻,要用口大的枪头.为了抽提效果好所以延长
TE缓冲液是弱碱性,对DNA的碱基有保护性,(DNA在它是的稳定性较好,不易破坏其完整性或产生开环及断裂),包括提取好的DNA也要放在TE缓冲液是保存.
变浑浊吧,变成白色沉淀啦.是dna和少量蛋白质析出.
可以通过测定它的浓度和OD值,还有办法就是点样和marker比较亮度.因为marker是知道浓度的.
Tris饱和酚分上相(tris)和下相即有机相酚,这样保存可以避免酚的挥发以及防止酚类氧化成醌,抽提时取下层酚相.在吸取的时候要将枪头插到水相以下的酚相.若吸到的是上层tris溶液,它会与我们的上清互
1:低温导致植物组织冻裂,方便研磨使细胞破碎,使DNA释放完全2:低温情况下各酶处于低活性状态,有利于抑制DNAase的作用,保护DNA
下游做PCR的话,应该保证模板的纯度,CTAB法提取多半会得到浓度不错但纯度不够的DNA,建议将得到的DNA进行纯化,或者直接使用试剂盒提取,现在的国产试剂盒都还不错的,节约时间又不贵
1)取材料,加液氮研磨成粉末状,迅速移入1.5mlEppendorf管中;(2)加入800μl的CTAB提取缓冲液,混匀(CTAB在65℃水浴预热),每5min轻轻震荡几次,20min后12000r/
不加液氮也可以,前题是可以把材料研磨碎.我以前提DNA加液氮是要提二三十管时用的,液氮可以快速研磨材料.
不能直接加CTAB,只有充分研磨成干粉后在加CTAB,如果直接加CTAB,由于植物中水分和糖分多,成粘稠状不易被充分研磨.DNA也不能充分释放,还容易导致DNA断裂降解等.
看你的DNA用来干嘛了,如果要求不高可以不加再问:做普通PCR,我知道能提出DNA几乎就可以了,只是我想弄明白加BI这一步的作用,有劳赐教,谢谢。再答:你的bi全称是什么?
先将植物细胞用纤维素酶和果胶酶处理,得到没有细胞壁的原生质体,然后把原生质体放入蒸馏水中使其胀破,然后进行离心,分离出叶绿体(比较明显,一层绿色的),然后把分离得到的叶绿体打碎(用搅拌机),把打碎后的
真菌的细胞成分和植物是有差别的,这种专一性的植物DNA提取试剂盒不一定能提好真菌的DNA.如果有条件你最好是买专一性的真菌DNA提取试剂盒.不过植物DNA提取的CTAB法确实可以适用于真菌的DNA提取