不同蛋白的等电点如何离子柱纯化-搜答案-智慧作业帮

His-tag和镍的结合依赖电荷作用,其亲和力与pH值有关.降低pH值机会降低His-tag与镍的结合,从而把His-tag蛋白洗脱下来.　　注意事项镍柱的说明书写得很清楚.

离心完之后,包涵体的密度最大,沉在最底下,不溶蛋白密度稍小一些,在包涵体上层.绝对区分是不可能的,提包涵体的时候都会有一些杂蛋白提出来,有些就是不溶蛋白再答：离心之后把沉淀提取出来溶解后跑SDS-PA

GST标签太大了,HIS小,但是估计没GST好纯化,我用的是HIS标签,结果,总有两个杂蛋白去不掉,挺郁闷,上AKATA效果也不怎么好如果多个大个的GST不影响你蛋白活性的话,那GST吧.

等电点如何计算

等电点的计算：对于所有的R基团不解离的氨基酸而言（即解离只发生在α-羧基和α-氨基上）,计算起来非常简单：PI＝（PK1’+PK2’）/2若是碰到R基团也

Ni柱中的氯化镍可以与有HIs（组蛋白）标签的蛋白结合,也可以与咪唑结合.步骤是：过柱子前可以选择Ni柱重生,也就是往柱子里倒氯化镍,一个柱长体积就行了,然后平衡柱子,拿你自己的buffer,给蛋白提

主要有：等电聚焦：使电泳的介质中形成一定范围的pH梯度,电泳时待分离的两性分子可以在这种pH梯度中迁移,直到聚集于与其等电点相同的区域.该技术特别适用于分子量相近而等电点不同的蛋白质分离和分析.等电点

酪蛋白是牛奶中主要的蛋白质成份,是牛奶变酸后形成的凝乳状物质,含有21种氨基酸

酪蛋白的等电点（PI)为4.6

3Fe2++NO3-+4H+=3Fe3++2H2O+NOFeSO4+NO=Fe（NO）SO4.这个就可以了NO3-完全转化为气体就可以定量了

在某个PH值的缓冲溶液中,该氨基酸电泳时不再涌动,即是达到一个电荷平衡,该PH值就是该氨基酸的等电点

不同的常见蛋白质等电点参考值蛋白质等电点鲑精蛋白[salmine]12.1鲱精蛋白[clupeine]12.1鲟精蛋白[sturline]11.71胸腺组蛋白[thymohistone]10.8珠蛋白

因为蛋白质在其等电点的时候溶解度最小,所以pH值过大或者过小都会使得酪蛋白析出不完全.因此必须用能够精确控制pH值的物质来调节酸度以保证析出完全.我当初做这个实验的时候,似乎不是用缓冲溶液,而是用冰醋

1,破细胞,高速离心收上清收集上清（同时平衡好柱子）；2,既然你是His-tag,用Ni-NTA之类的柱子,两次上柱,buffer平衡；3,低浓度咪唑（5mM）洗5-10柱体积,以洗去杂蛋白；4,过梯

1.当蛋白质溶液处于某一pH时,蛋白质解离成正、负离子的趋势相等,即成为兼性离子,净电荷为零,此时溶液的pH称为蛋白质的等电点.在等电点时蛋白质的溶解度最小,在电场中不移动.在pI时,蛋白质失去了胶体

按说明书来,肯定是用Amylmose亲和柱.FactorXa是随kit一起的工具酶,用于纯化后把融合蛋白的tag切下.EK酶也是这个功能.但是对于不同系统有不同的酶.你这个系统只能用Amylmose亲

测量,原理

有his标签么?要不就是beads的事?是你自己装的柱么?多长时间了?还有可能是你的蛋白构象变了,可能把his部分裹在里边了,找找别的条件,或者换NC端.

因为,纯化过程包括对大肠杆菌的裂解和对目标蛋白的纯化,经纯化后,大部分的杂质（杂蛋白、糖和核酸）都去除了,对ELISA的干扰小.如果不纯化,大肠杆菌本身是有众多生物分子的,这都是潜在的干扰性抗原.

不会

你的蛋白表达的是可溶还是包涵体?再问：都有，用上清纯的，纯不出来，可能的原因是什么？