1个DNA分子进行PCR扩增,循环N次,理论上至少需要几个引物

正向引物：5'CTTCGAAATTC反向引物：5'CCGATCGGGAGA(TCTCCCGATCGG的反向互补序列）当然,这对引物有些短,其实真正设计时上下游引物的序列中都可包含部分基因1的序列,以平

跑胶中的染料应该是对身体有害

PCR技术过程简介1.将目的基因与引物,以及耐高温的DNA聚合酶加入PCR扩增仪中.加热到90~95℃.让目的基因解旋.2.降温至55~60℃,让引物与①中的DNA单链结合.3.加热至70~75℃,让

如果是双链,第一次循环要1对引物,第二次要2对,第三次4对,第四次要8对.总共15对.上下游引物各15条.如果是单链,第一次循环要1条引物,第二次要1对,第三次2对,第四次要4对.总共7对半.上下游分

第二次比如目的基因是300bps,母链DNA2000bpsforwardprimer从母链第25碱基开始由5'-3'开始复制,backwardprimer从第325由3'-5'开始反向复制.第一次复制

只要有目的基因的片段存在,无论是质粒还是基因组还是其他类型的DNA片段,都是可以的.

样品可以用细胞也可以用细胞里提取的DNA试剂DNA聚合酶（依赖于你的目的选择普通Taq酶还是高保真Taq酶）DNA聚合酶附带的缓冲液,MgCl2（可能有可能没有,没有的一般是公司添加到额缓冲液里了）d

这个,出现非特异性扩增估计跟模板,引物,以至于反应条件都有关系.可以减少延伸时间,因为你扩的片段很小,没有必要花很长时间延伸.我PSSR的程序是94度35s55度35s72度45s前面的预变性和最后的

换一对引物试试再问：换了三对了，就是没有目标带再答：模板量少点不知道有没有用酶切来提高基因组PCR成功率这种做法哈如果你是在别的地方看到这方法可行就试试吧

组蛋白基因(histonegene)组蛋白基因在各种生物体内重复的次数不一样,但都在中度重复的范围内.通常每种组蛋白的基因在同一种生物中拷贝数是相同的.鸡的基因组中组蛋白基因有10个拷贝,在哺乳动物中

因为DNA聚合酶需要结合在双链区域,才能启动后续的脱氧核糖核苷酸的聚合作用.因此需要引物（PCR中是DNA,而生物体内是RNA）来构成双链区,从而使DNA聚合酶识别并结合,启动聚合作用.

可以的博凌科为的高保真PCR扩增试剂盒提供DNA高保真扩增所需要的基本试剂.DNA扩增时,用户需要自行准备模板和扩增所需要的引物.高温嗜热PfuDNA聚合酶主要用于对保真度要求非常高的DNA扩增,这些

可能有很多原因,最常见的原因是1.模板不干净,2.引物设计不当,3.退火温度过高,等等

PCR不能扩增长点的DNA分子.要先截断后PCR,再连接.PCR出来的DNA是有误差的,尤其是后面几个循环.PCR常用来检验有没有某DNA.一些重组DNA分子比较大,比如说质粒.质粒在宿主细胞可以复制

1、软件预算2、利用梯度PCR优化退火温度

20分钟

如果你做的是非常靠谱的绝对定量RT-PCR,可以根据标曲算.但实际上对包括RT-PCR在内的PCR产物浓度定量,更简单、更靠谱的办法是：1,加标准marker电泳,用照胶自动分析系统计算,可以大致定量

这个看上去像是你在做梯度PCR,所以有很多条带是弥散状的,你可以把比较清晰的条带回收回来,作为模板,利用你之前做梯度得到的优化后的PCR条件再进行一次PCR,看效果如何.补充：这样的话,可能是你不同样

2个办法1.直接使用提纯试剂盒,去掉其他成分,或者跑胶后切胶提纯2.克隆到载体质粒,再进行其他操作

是目的基因这样才能说明你转化进去的是连了目的基因的质粒而不是自连的质粒.转化后挑菌摇菌后提了质粒才能测序,浓度才够再问：谢谢，在下是新手。再问一下：是连了目的基因的质粒还是单纯的目的基因呢？提质粒测序