聚丙烯酰胺盘状凝胶电泳的几个不连续性是什么

来源：学生作业帮编辑：作业帮分类：生物作业时间：2024/05/22 20:31:57

将丙稀酰胺、甲叉双丙稀酰胺、缓冲液和催化剂等溶液按一定比例加到用琼脂封了底的玻璃管中,聚合后得到圆柱胶.柱胶胶面之上加上待分离的样品,接入直流电源电路中,经过一定时间的电泳,样品中各组分在柱胶中得到分离,分布在不同层次上.电泳结束后将胶条剥出,经染色、脱色处理,从胶条侧面可见到一个一个的组分条带,与多个圆盘迭加在一起相似,故将在柱胶中进行的电泳分离技术称为聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳.
实际操作时,在玻璃管中分两次灌胶.先灌下层的分离胶,待其聚合后再灌上层的浓缩胶.这样制得的凝胶柱实际上是个不连续体系.利用该体系中凝胶孔径的不连续性、缓冲液离子成分的不连续性、pH的不连续性及电位梯度的不连续性,先使进入柱胶的样品在浓缩胶中逐渐浓缩、在上下胶层界面上最终被压缩成很薄的样品区带,进入分离胶后再进行组分的分离,形成最终的分离区带.根据分离胶缓冲液pH值高低,有3种操作系统,分别为碱性系统、酸性系统和中性系统,其中以碱性系统最为常用.
在浓缩胶中,除了有电荷效应和分子筛效应外,还存在一种特殊的浓缩效应.该效应是以上多种不连续效应综合作用的结果.这种不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳由于兼有电荷效应、浓缩效应和分子筛效应,因此具有很高的分辨率.其分子筛效应主要由凝胶孔径大小决定,而决定凝胶孔径的大小主要是凝胶的浓度.但交联剂对电泳泳动率亦有影响,交联剂重量对总单位重量的百分比越大,则电泳泳动率越小.不管交联剂是以何种方式影响电泳时的泳动率,总之它是影响凝胶孔径的一个重要参数.为了使实验的重复性较高,在制备凝胶时对交联剂的浓度、交联剂与丙稀酰胺的比例、催化剂的浓度、聚胶所需时间等影响泳动率的因子都应尽可能保持恒定.

不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳——蛋白质的分离聚丙烯酰胺凝胶电泳的原理以及SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳的原理变性聚丙烯酰胺凝胶电泳和琼脂糖凝胶电泳的上样缓冲液一样不? 聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白质的原理 15%变性聚丙烯酰胺凝胶电泳的步骤 SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳不出带的原因不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳分离预染的血清脂蛋白为什么上下缓冲液分开回收变性聚丙烯酰胺凝胶电泳和非变性的有什么区别? 15%变性聚丙烯酰胺凝胶电泳的步骤和原理聚丙烯酰胺凝胶电泳变性与非变性的有什么不同? sds 聚丙烯酰胺凝胶电泳浓缩胶凝的太快怎么办? 变性聚丙烯酰胺凝胶电泳中胶的制备需要哪些必备药品?变性剂是什么?还有用水平电泳可以吗?