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酶切时质粒的量是不是1ug,是可用于所有的体系么?

来源:学生作业帮 编辑:作业帮 分类:综合作业 时间:2024/05/25 03:41:37
酶切时质粒的量是不是1ug,是可用于所有的体系么?
这个没有特别的规定吧,你是酶切鉴定,还是酶切质粒得到目的片段?对于10ul的酶切体系我们一般加入2ul质粒,大概是400ng左右.
再问: 就是酶切鉴定,你的意思是你们加入2ul的质粒,根据浓度,最终质粒算是400ng,是么?那这个质粒的量没有规定限制么?你这个质粒浓度是200ng/ul是么
再答: 我们酶切鉴定的时候一般就是加入2ul到10ul的体系里,因为你只是鉴定一下,能在胶上跑出来就行了,所以对量没有很严格的要求。我们提的质粒一般150ng/ul左右,很少真正去测浓度的。如果你是鉴定,就不用加太多质粒了,那样很浪费。质粒的量没有什么规定。
再问: 但有的时候量少,较下面的带,就跑不出来了。你这是小提的浓度么
再答: 是小提啊,你用什么酶切的,NEB公司的酶吗?对了,你提取的质粒浓度大概是多少,我用得是PAGE跑的胶,你是用琼脂糖凝胶电泳吗?
再问: 我用的是takara的,是琼脂糖凝胶电泳,我就是想问一下,质粒的加入量,比如,你的是150ng/ul,加了2ul,那么就是质粒为300ng,这个300ng是质粒的规范量么,还是质粒的质量是有个范围的呢?
再答: 不是啊,一般提取出来的质粒浓度就有这么多啊,你的质粒是高拷贝的吗?如果你觉得量太少了,你可以加多一点,比如3或4ul,酶切的时间长一点,可以切一个小时。我们是用nanodrop测的浓度,根据我的试验经验,没必要那么定量,要是切一次,觉得是量太少,可以多加质粒,或者是不是你的酶有问题,可以尝试用新的酶切一下,或者加入多一点的酶,我们现在加入NEB的酶一般是0.2ul