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质粒提取和电泳相关这几天,我将pET-2双酶切后电泳,总是没有条带,而即使直接将pET-2质粒放上去电泳,条带也很微弱.

来源:学生作业帮 编辑:作业帮 分类:综合作业 时间:2024/05/18 10:43:29
质粒提取和电泳相关
这几天,我将pET-2双酶切后电泳,总是没有条带,而即使直接将pET-2质粒放上去电泳,条带也很微弱.质粒我是和目的基因PrGVORF37 一起提的,37没有问题,跑出来是正常的,但是就pET-2不正常,不知道什么原因.我起初怀疑pET-2质粒有问题,又重新提了些质粒,但是结果还是一样,酶切后没有条带,请高手指导下什么原因.Ps:用碱裂解提取的质粒
可是我已经是从15ml菌中提了后用15微升的TE溶解了...我先前是怀疑过提的量少,但是重新提还是这样,15ml只提15微升,这样的浓度还不够,估计哪里有问题。
pET系列载体本身不是高拷贝质粒,因此从你说的“直接将pET-2质粒放上去电泳,条带也很微弱”就说明你提取的量就很少,所以显示的比较弱.再酶切以后就更弱了.
建议你从5~10ml比较浓的菌液中再次抽提质粒,首先要达到质粒浓度够高,然后再酶切检测.