琼脂糖凝胶电泳没有跑出条带是怎么回事

来源：学生作业帮编辑：作业帮分类：综合作业时间：2024/05/14 04:29:17

琼脂糖凝胶电泳没有跑出条带是怎么回事
用1%的琼脂糖凝胶,70V左右的电压下电泳,肉眼可以看到DNA样和Marker的蓝色跑到了3分之2处,但在紫外灯下只有Marker跑出了条带,但不明显,DNA样完全没跑,只在孔的地方有荧光

原因很简单.样品里的目的片段DNA量太少,所以没有检测到.
再问：是这个原因吗？点样的孔那里是有荧光的
再答：具体是什么样品？加样孔周围的荧光可能是基因组DNA。
再问： cDNA用PCR扩出来的DNA
再答：那就是PCR没做出来，加样孔周围是基因组DNA。
再问： PCR变性退火什么的条件和之前一样扩出来过，这次加样量跟之前不同，没扩出来是这个原因吗
再答：我只是根据电泳结果判断你的PCR失败，但是PCR失败的原因可能有很多，加样量只是其中之一。
再问：那什么条件做电泳跑出的条带会很明显啊
再答：你的问题并不是琼脂糖电泳没跑好。
再问：我知道但是我之前扩出了PCR电泳跑得也不是很好之前出现的情况是marker条带都很清楚但是DNA条带很模糊荧光也很浅当时用的是0.8%的琼脂糖想知道怎么能让条带更清晰
再答：　　只要marker很清楚，DNA胶本身就没问题。你的PCR产物不清楚，一是上样量不够，二是DNA样品可能有降解，不要反复冻融。
再问：我的DNA样每次都是现用cDNA扩出来的有可能是cDNA降解了吗？一般的上样量就是5，6微升吧？
再答：上样量不是固定的，你可以根据自己的情况加多加少。至于PCR，要不你换个Taq酶试试，可以用TAKARA的ExTaq试试。

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