作业帮PCR复性温度如何确定
来源：学生作业帮 编辑：作业帮 分类：生物作业 时间：2024/06/06 09:26:19
PCR复性温度如何确定
为什么要在最后延伸10min?
是否有非特异性扩增产物（或引物二聚体），如何消除？
为什么要在最后延伸10min?
是否有非特异性扩增产物（或引物二聚体），如何消除？
延伸温度根据你使用的Taq来确定就好了,一般都在70度上下,嫌麻烦就定个70度长期使用.你买的taq的说明书上会给你建议的温度.
退火的温度定在55度就ok了,万年不变也没有关系,50度到60度都差不多.这个说明书也会给.
变性95度上下几乎万年不变.
最后延伸是为了把没有延伸完的片段（如果有）补全.一般4分钟以上都ok.
非特异性扩增产物看你的引物设计的好不好,设计的好就不太会有.
引物二聚体也是,注意设计的引物的二聚体绝对不能在末端配对成功,这会大大降低引物的效率.
二聚体几乎不可避免,所以PCR完成之后,立刻跑个胶,切胶回收就好了,这样二聚体就不会被回收回来,非特异性产物也会减少很多.
退火的温度定在55度就ok了,万年不变也没有关系,50度到60度都差不多.这个说明书也会给.
变性95度上下几乎万年不变.
最后延伸是为了把没有延伸完的片段（如果有）补全.一般4分钟以上都ok.
非特异性扩增产物看你的引物设计的好不好,设计的好就不太会有.
引物二聚体也是,注意设计的引物的二聚体绝对不能在末端配对成功,这会大大降低引物的效率.
二聚体几乎不可避免,所以PCR完成之后,立刻跑个胶,切胶回收就好了,这样二聚体就不会被回收回来,非特异性产物也会减少很多.