作业帮【求助】有关细胞划痕法操作中不明白的
来源：学生作业帮 编辑：作业帮 分类：生物作业 时间：2024/05/10 19:49:34
【求助】有关细胞划痕法操作中不明白的
我做的是大鼠血管平滑肌细胞的迁移能力测定
给予不同浓度高糖刺激，并给予不同浓度药物干预后观察
这是网上搜到的流程：
先用marker笔在6孔板背后，用直尺比着，均匀得划横线，大约每隔0.1cm一道，横穿过孔。每孔至少穿过5条线。
在空中加入约5X105个细胞，具体数量因细胞不同而不同，掌握为过夜能铺满。
第二天用枪头比着直尺，尽量垂至于背后的横线划痕，枪头要垂直，不能倾斜。
用PBS洗细胞3次，去处划下的细胞，加入无血清培养基。
放入37度5%co2培养箱，培养。按0，12，24小时取样，拍照。
我的问题是：
司徒镇强的细胞培养书中细胞划痕的具体操作是：包被基底膜-水化基底膜-制备单层细胞-人工划痕-测量迁移率，但是我看到的网上的资料同上，没有制备基底膜这步，所以，是不是不用制备基底膜？
2.上面第4步中PBS清洗后是不是可以直接加条件培养基？
3结果能不能数4个不同象限迁移的细胞数来判断迁移能力？
希望做过这个实验的朋友帮忙解答下，
还有就是到了第三步，用枪头划之前需要把培养液倒掉吗？还是划完后再倒掉旧的培养液换成条件培养基？
我做的是大鼠血管平滑肌细胞的迁移能力测定
给予不同浓度高糖刺激，并给予不同浓度药物干预后观察
这是网上搜到的流程：
先用marker笔在6孔板背后，用直尺比着，均匀得划横线，大约每隔0.1cm一道，横穿过孔。每孔至少穿过5条线。
在空中加入约5X105个细胞，具体数量因细胞不同而不同，掌握为过夜能铺满。
第二天用枪头比着直尺，尽量垂至于背后的横线划痕，枪头要垂直，不能倾斜。
用PBS洗细胞3次，去处划下的细胞，加入无血清培养基。
放入37度5%co2培养箱，培养。按0，12，24小时取样，拍照。
我的问题是：
司徒镇强的细胞培养书中细胞划痕的具体操作是：包被基底膜-水化基底膜-制备单层细胞-人工划痕-测量迁移率，但是我看到的网上的资料同上，没有制备基底膜这步，所以，是不是不用制备基底膜？
2.上面第4步中PBS清洗后是不是可以直接加条件培养基？
3结果能不能数4个不同象限迁移的细胞数来判断迁移能力？
希望做过这个实验的朋友帮忙解答下，
还有就是到了第三步，用枪头划之前需要把培养液倒掉吗？还是划完后再倒掉旧的培养液换成条件培养基？
1、不需要制备基底膜了.
2、最好用无血清培养基洗涤细胞
3、可以用迁移的细胞数来说明细胞迁移能力
4、划痕以后需要洗涤细胞,然后加入条件培养基.
2、最好用无血清培养基洗涤细胞
3、可以用迁移的细胞数来说明细胞迁移能力
4、划痕以后需要洗涤细胞,然后加入条件培养基.