PCR的问题最近在扩一段果蝇基因,得用CDNA做模板大概2K,60度以下扩不出来,60度以上扩出来的全是杂带.总之大家能

来源：学生作业帮编辑：作业帮分类：综合作业时间：2024/06/06 00:34:37

PCR的问题
最近在扩一段果蝇基因,得用CDNA做模板大概2K,60度以下扩不出来,60度以上扩出来的全是杂带.总之大家能想到的都试过,咋回事呢?
那段基因引物是不是很好设，能用的都用了，26个碱基的引物，扩基因组能扩出来。克隆的基因确实是低丰度表达的。55度都扩不出来，高温的扩出来都是杂带。以前用别人的CDNA跟用我刚P的CDNA结果是一样的，据说用CDNA扩2K的片段很难。

1、跑个胶看RNA质量及有无降解,杜绝RNase的污染.
2、引物适合吗?
3、克隆的基因是低丰度表达的吗?如果是,扩增起来不是很顺利的.
4、上面都没问题的话,试着降低退火温度看看.
你参考一下,这里有RT-PCR常见问题与分析：
嗯.我是这么认为的,实验的引物、反应条件和反应体系都好解决.检测cDNA模板质量是关键.像目的基因的丰度（找到该目的片段丰度比较高的细胞来进行PCR,会有较好的效果）,片段长度（长片段逆转录时逆转录酶的效率不高,建议分段扩增）,RNA酶是否存在,都会影响cDNA模板质量.在保证cDNA模板质量前提下,建议从比较低的温度开始,待扩出目的片断后,再适当提高退火温度减少非特异带.别看我很懂得样子,实际做起来就是很辛苦.

基因克隆实验克隆实验问题 1、以cDNA为模板做PCR反应,得到的产物和预期的长度一样.2、再用pMD-19载体连接目的 RT-PCR做不出来我是一个新手,我现在在做反转录,在PCR,可是我扩了好几次,就是做不出什么,我排除了试剂的问题,就是电泳目的什么做完PCR扩增,点merker跑电泳,出来一张图,在170k有一个白色杠杠,这能代表什么?能代表我的PCR扩请问想问下在以cDNA为模板时,PCR的结果却是徒步什么原因我想做胰岛素导入大肠杆菌的基因克隆实验.在ncbi中查找到了cdna,准备跑pcr,这个时候需要提取出cdna模 PCR扩增不出来条带的原因? 土壤细菌DNA 小弟我提土壤总DNA准备PCR细菌中一种酶的基因,可以半个月过去了,一直P不出来条带,我自己感觉模板存在 PCR引物设计问题如果我设计的引物,扩增出来的目的片段长度为200BP,但是石蜡包埋组织提取出来的DNA模板大多数在10 检测到一段N端氨基酸序列DNSCTGEHARYPMVWFIK,现要作PCR扩基因,在NCBI上blast找不同源的,请问知道一个基因两端的序列,中间有一段未知,用哪种PCR法把未知片段扩增出来啊? 组织提取的cDNA和细胞提取的cDNA用同一引物PCR扩增出来的条带长度不一样,是什么原因?有什么方法改进吗如何检测cDNA我做RT-PCR想在PCR之前检测下我的cDNA看下逆转录有没有问题,请问高手如何检测,跑电泳可以吗,那