请问你做PCR之后出现弥散的带,现在解决了吗,怎么解决的?我用cDNA做模板,也出现这种情况.

来源：学生作业帮编辑：作业帮分类：综合作业时间：2024/05/11 19:08:12

我也是用cDNA做模板的,没有出现过弥散带的情况,但经常出现非特异性条带.出现弥散带的原因可能是你在做凝胶电泳时电泳液被污染或者是做的胶有问题,也可能是你的cDNA部分降解了,至于降解的原因主要是由于时间和温度.扩增完的东西要立即进行电泳,其次电泳的室温不宜太高时间不要太长,一般最多半个小时左右.另外在扩增过程中,由于气候的缘故,部分PCR仪在室温超过30度后就不能正常工作了,这要看PCR仪的型号,其次是前期的RNA提取的效果不好,或者是提取的RNA已经出现降解导致cDNA模板质量受到影响.
最后要说一下关于PCR部分,PCR的体系和退火温度很重要,特别是镁离子的浓度,最好是用正交试验摸索出最好的体系,然后用温度梯度找到最适合的退火温度.因为设计的好不好也是重大问题之一啊,你先试试看吧!
再问：我又做了一次，相同条件，可是这次什么条带也没出现。我提的RNA用DNase处理过，然后检测，质量可以，有可能量有点少。一般你们PCR体系，10ul的话加多少模板？

为什么我做定量PCR无CT值（信号）出现?怎么解决呢请问,我反转录时设置了2个循环,cdna还可以做半定量PCR吗?Actin的pcr在500bp单一条带. realtime ）就是想做个梯度稀释的cDNA的标准曲线,请问我应该怎么做,我用的是Roche的荧光定量PCR仪,请问我手机i9100 我手机也出现你的问题了 The Mystery of the crystal portal你是怎么解决你的数控车床X轴方向尺寸不稳定是怎么解决的?我做的一台沈阳机床广数980Tdb系统的也出现这样问题你安装IAR后还出现No valid license found for this product 是怎么解决的啊,我也我的PCR条带弥散,阴性对照也弥散,但是不加引物不弥散,当然也没有条带,请问都是什么原因啊? 什么是流动性过剩,它是怎样形成的~其他国家以前出现过这种情况吗?怎样解决它? 如何检测cDNA我做RT-PCR想在PCR之前检测下我的cDNA看下逆转录有没有问题,请问高手如何检测,跑电泳可以吗,那 ABAQUS出现关键字错误该如何解决?我做的是瞬态动力学分析用基因组DNA做模板进行PCR扩增,设计引物所选序列也用cDNA为模板有什么不同我的STEAM怎么出现这种情况?