作业帮PCR引物设计 5‘端富集GC 3’端少GC而且以T结尾 这样对吗
来源：学生作业帮 编辑：作业帮 分类：语文作业 时间：2024/05/11 04:30:35
PCR引物设计 5‘端富集GC 3’端少GC而且以T结尾 这样对吗
这样还不错.5‘段增加稳定性,3’端最好不要有太多的GC,一般来说,最后5个碱基里不要出现超过2-3个G或者C.因为3‘端是扩增的关键,一旦出现3’端的错配或者二聚体,因为GC配对是较为牢固的,是难以解开的.就可能会造成非特异扩展.
但是我建议最后一个如果可以的话以G、C结尾.
其实以我的经验,设计引物的那些原则可以不要太讲究,毕竟能跑出来才是硬道理.跑得漂亮自然更好.对于有些复杂区域,本来就很难设计引物,勉强也在所难免.
再问： 引物除了5端添加特异酶切位点类似的修饰以外，其他区域都要严格与模板相同或反向互补吗？
再答： 恩，最好是这样的。当然你说这个5端也很难划分具体有多长。因为还要看引物总长是多少。 建议中间和3端是不要有人为修改的。
但是我建议最后一个如果可以的话以G、C结尾.
其实以我的经验,设计引物的那些原则可以不要太讲究,毕竟能跑出来才是硬道理.跑得漂亮自然更好.对于有些复杂区域,本来就很难设计引物,勉强也在所难免.
再问： 引物除了5端添加特异酶切位点类似的修饰以外，其他区域都要严格与模板相同或反向互补吗？
再答： 恩，最好是这样的。当然你说这个5端也很难划分具体有多长。因为还要看引物总长是多少。 建议中间和3端是不要有人为修改的。