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发现一个细胞膜蛋白,序列分析发现是一个多次跨膜蛋白.请设计实验确定跨膜次数及其末端朝向.

来源:学生作业帮 编辑:作业帮 分类:生物作业 时间:2024/05/15 08:47:42
发现一个细胞膜蛋白,序列分析发现是一个多次跨膜蛋白.请设计实验确定跨膜次数及其末端朝向.
有助于回答者给出准确的答案
给个方向吧,其实把题变一下更好:你新发现一个细胞膜蛋白,通过序列分析发现是一个多次跨膜蛋白.为了确定跨膜次数及其末端朝向,你在细胞内高表达了该蛋白,然后通过免疫荧光术去标记细胞.当你用抗N端抗体直接标记活细胞时,出现膜上荧光,而用抗C端抗体时却没有.用甲醇固定细胞(此时细胞膜被破坏)后,则两种抗体都出现膜上荧光标记.将细胞膜分离纯化,然后用蛋白酶充分降解膜外部分,再经SDS-PAGE和银染,发现有10条主带,其中三条在对照细胞(即仅转染了空质粒载体的细胞)的相应样品中也有.如果先用蛋白酶处理,再分离细胞膜,那么,你会发现6条主带,而对照样品有其中的两条.从这些结果,你能得出什么结论?在此之后,你打算开展哪些方面的研究?
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