作业帮 > 生物 > 作业

请问：人工做微生物质粒的传递问题

来源：学生作业帮 编辑：作业帮 分类：生物作业 时间：2024/05/24 16:36:01
请问：人工做微生物质粒的传递问题
在自然界某些微生物互相接触就可形成质粒传递（当然这只是一部分）,人们为了扩大微生物质粒的传递面,需对那些不能传递的微生物进行外理,请问这一工作是怎样进行的?
要进行转化工作,相对复杂.你的问题过于不具体了,请详细说明你想处理哪些微生物.我先对转化工作做一简要解释：转化（transformation）是将一种生物（供体）的遗传物质（通常为DNA）转入另一种生物（受体）并使其在受体中得以保存和繁殖的过程.大肠杆菌不是天然感受菌,在低温（0~5℃）环境下经CaCl2处理,细胞壁变松变软后能摄入外源DNA,这种状态称为感受态细胞（competent cell）.经CaCl2处理后大肠杆菌与外源DNA混合进行42℃短时间的热激可利于外源DNA转化,然后再经过恢复和筛选,选择转化子.
1．从甘油保存菌种中接种一环 E.coli至LB平板上,37℃倒置培养过夜.
2．挑取2~3mm直径的单菌落接种至有50ml LB液体培养基的三角瓶中,37℃震荡培养2小时（摇床转速250r/min）当OD590为0.375即可.
3．吸取1.4ml菌液至Eppendorf管,7000g离心2min,弃上清,并倒置于吸水纸上.
4．重复步骤3一次.
5．将细菌悬浮于1ml预冷的0.1mol /lCaCl2溶液中,置冰浴10min.
6．7000g离心2min,弃上清,收集细菌.
7．将细菌重悬于200μl预冷的0.1mol /l CaCl2 溶液,冰浴30min.
8．每管加入质粒DNA50ng/10μl,轻轻混匀,冰浴放置20min,设一不加质粒DNA的对照.
9．将管置于42℃水浴中2min,不要摇动.
10． 迅速转移至冰浴2min.
11． 加入800μlLB液体培养基,37℃培养45min,以便转化菌表达抗性.
12． 接种到含100μg/ml Amp的LB冷平板上.
13． 将平板倒置入37℃恒温培养箱培养过夜.
14． 确信对照无菌落时,在Amp培养基上长出的菌落即是转化子.
如果有什么具体问题请留言
请问：做微生物质粒转化耐药实验是否不限菌种? 请问：微生物质粒在什么条件下可传递?异种能否? 请问：怎样提取微生物的质粒（DNA）? 为什么作为质粒的载体都是经人工改造的 我想做人工湿地微生物鉴定,请高手指点哪里可以做pcr dgge检测,北京地区的单位或者公司 请问做微生物菌肥的发酵罐大约多少钱? 质粒转染细胞不表达的问题~ 质粒载体是在天然质粒的基础上为适应实验室操作而进行人工构建de 请问传递的近义词? 请问这位高手,我也是用pfastbac载体做家蚕细胞的 请问怎么构建质粒表达载体 自然发酵与人工发酵葡萄酒的微生物机理 请问质粒的测序目的是什么?要做实时定量PCR和这一步有关联吗?