作业帮对于载体的单酶切和双酶切,胶图分别会如何?为什么会这样啊?
来源：学生作业帮 编辑：作业帮 分类：生物作业 时间：2024/05/13 09:43:29
对于载体的单酶切和双酶切,胶图分别会如何?为什么会这样啊?
单酶切一个电泳道上会有几个比较亮的带,而且你所根据基因大小所选择的条带内也不一定是你要的.原因是单酶切形成的粘性末端完全相同,就像拼图,除了内容不同,两边完全切合.所以结合方式过多,可能性也多,如质粒和目的基因正确连接,质粒和目的基因反转连接,质粒和质粒连接,目的基因与目的基因的连接.
双酶切一般会有3条带,而且正确现象应只有一个是非常亮的.因为两种酶识别两个位点切开,无论是质粒还是目的片段两端的粘性末端完全不同,还是拼图,内容不同,两端切合口也不同,除了一种连接方式外没有其他连接了.胶途中3条带分别为：目的片段条带,空质粒条带,最亮的重组质粒条带.
再问： 谢谢您的回答，但我还有些疑问~单酶切不是只在一个地方切开吗？质粒环变成线性吗？没有加酶，怎么会连接呢？ 还有双酶切中，我只切载体，为什么会有重组质粒~~
再答： 最近出差，回来晚了哈。 那我对你的问题看的多了。你如果酶切就电泳的话就简单了。首先你去查下你是什么质粒，你用的质粒上都有什么酶切位点，重点是一种酶的酶切位点有几个。这个会改变酶切片段的数量。 下面我假设你用EcoR I 和Hind III两种限制酶酶切，质粒上只有一个酶切位点 1、单酶切应该是一条带。原理，一个酶切位点只是把环状DNA的质粒切成了链状，这条DNA的分子大小无变化，而且所有的都是一样大小。 2、双酶切应该是3条带。原理，双酶切最终形成的是2个片段，一般这两个片段一大一小、小的是没用的，大的是用来连接下一步目的基因的。他俩在电泳上的顺序是小的在上，大的在下。最后一个条带是没有被切开的，或这是只有一种酶处理了的质粒。 这3条带的亮度根据酶的量以及处理时间会发生变动（简单理解就是酶切是否充分）。如果酶的量适宜，且时间足够，那么应该是上面的亮，下面的暗。反之则下面量，上面暗。
双酶切一般会有3条带,而且正确现象应只有一个是非常亮的.因为两种酶识别两个位点切开,无论是质粒还是目的片段两端的粘性末端完全不同,还是拼图,内容不同,两端切合口也不同,除了一种连接方式外没有其他连接了.胶途中3条带分别为：目的片段条带,空质粒条带,最亮的重组质粒条带.
再问： 谢谢您的回答，但我还有些疑问~单酶切不是只在一个地方切开吗？质粒环变成线性吗？没有加酶，怎么会连接呢？ 还有双酶切中，我只切载体，为什么会有重组质粒~~
再答： 最近出差，回来晚了哈。 那我对你的问题看的多了。你如果酶切就电泳的话就简单了。首先你去查下你是什么质粒，你用的质粒上都有什么酶切位点，重点是一种酶的酶切位点有几个。这个会改变酶切片段的数量。 下面我假设你用EcoR I 和Hind III两种限制酶酶切，质粒上只有一个酶切位点 1、单酶切应该是一条带。原理，一个酶切位点只是把环状DNA的质粒切成了链状，这条DNA的分子大小无变化，而且所有的都是一样大小。 2、双酶切应该是3条带。原理，双酶切最终形成的是2个片段，一般这两个片段一大一小、小的是没用的，大的是用来连接下一步目的基因的。他俩在电泳上的顺序是小的在上，大的在下。最后一个条带是没有被切开的，或这是只有一种酶处理了的质粒。 这3条带的亮度根据酶的量以及处理时间会发生变动（简单理解就是酶切是否充分）。如果酶的量适宜，且时间足够，那么应该是上面的亮，下面的暗。反之则下面量，上面暗。