固定、脱水后的冷冻切片如何做HE染色?
来源:学生作业帮 编辑:作业帮 分类:生物作业 时间:2024/05/21 10:35:04
固定、脱水后的冷冻切片如何做HE染色?
具体是组织多聚甲醛固定,蔗糖水脱水后进行冷冻切片,然后如何操作HE染色?
具体是组织多聚甲醛固定,蔗糖水脱水后进行冷冻切片,然后如何操作HE染色?
染色流程
(1)二甲苯(Ⅰ) 15min (2) 二甲苯(Ⅱ) 15 min (3)100%乙醇(Ⅰ) 5min (4)100%乙醇(Ⅱ) 5 min (5)80%乙醇 5min (6)蒸馏水 5 min (7)苏木精液染色 5 min (8 ) 流水稍洗去苏木精液 1-3 s (9) 1%盐酸乙醇 1-3 s (10) 稍水洗 10-30 s (13)蒸馏水过洗 1-2 s (14) 0.5%伊红液染色 1-3 min (15) 蒸馏水稍洗 1-2 s (16) 80%乙醇稍洗 1-2 s (17) 95%乙醇(Ⅰ) 2-3 s (18) 95%乙醇(Ⅱ) 3-5 s (19) 无水乙醇 5-10 min (20) 石炭酸二甲苯 5-10 min (21) 二甲苯(Ⅰ) 2 min (22) 二甲苯(Ⅱ) 2 min (23) 二甲苯(Ⅲ) 2 min (24) 中性树胶封固 注:①第(10)、(11)步可省去,(12)步冲水时间需延长至20-30min. ②第(20)步如果不用石炭酸二甲苯,可改用无水乙醇. * 冷冻切片HE染色步骤: (1)冰冻切片固定 10~30 s (2)稍水洗 2 s (3)苏木精液染色(60℃) 30~60 s (4)流水洗去苏木精液 10 s (5)1%盐酸乙醇 3 s (6)稍水洗 2 s (7)促蓝液返蓝 10 s (8)流水冲洗 15~30 s (9)0.5%曙红液染色 30~60 s (10)蒸馏水稍洗 2 s (11)80%乙醇 2 s (12)95%乙醇 2 s (13)无水乙醇 2 s (14)石炭酸二甲苯 3 s (15)二甲苯(Ⅰ) 3 s (16)二甲苯(Ⅱ) 3 s (17)中性树胶封固. 注:第(14)步如果不用石炭酸二甲苯,可改用无水乙醇. 染色结果:细胞核蓝色,胞质、肌纤维、胶原纤维和红细胞呈深浅不一的红色. 4.12 切片脱水透明 切片经HE染色后,要彻底脱水透明,才能用中性树胶封盖.如果脱水不彻底,封片后呈白色雾状,镜下观察模糊不清,且容易褪色.切片1-2级无水乙醇脱水,也可使用石碳酸二甲苯进行脱水.石碳酸有较强脱水能力,但长时间可使切片脱色,因此要经过多次二甲苯以使石碳酸完全除去.
(1)二甲苯(Ⅰ) 15min (2) 二甲苯(Ⅱ) 15 min (3)100%乙醇(Ⅰ) 5min (4)100%乙醇(Ⅱ) 5 min (5)80%乙醇 5min (6)蒸馏水 5 min (7)苏木精液染色 5 min (8 ) 流水稍洗去苏木精液 1-3 s (9) 1%盐酸乙醇 1-3 s (10) 稍水洗 10-30 s (13)蒸馏水过洗 1-2 s (14) 0.5%伊红液染色 1-3 min (15) 蒸馏水稍洗 1-2 s (16) 80%乙醇稍洗 1-2 s (17) 95%乙醇(Ⅰ) 2-3 s (18) 95%乙醇(Ⅱ) 3-5 s (19) 无水乙醇 5-10 min (20) 石炭酸二甲苯 5-10 min (21) 二甲苯(Ⅰ) 2 min (22) 二甲苯(Ⅱ) 2 min (23) 二甲苯(Ⅲ) 2 min (24) 中性树胶封固 注:①第(10)、(11)步可省去,(12)步冲水时间需延长至20-30min. ②第(20)步如果不用石炭酸二甲苯,可改用无水乙醇. * 冷冻切片HE染色步骤: (1)冰冻切片固定 10~30 s (2)稍水洗 2 s (3)苏木精液染色(60℃) 30~60 s (4)流水洗去苏木精液 10 s (5)1%盐酸乙醇 3 s (6)稍水洗 2 s (7)促蓝液返蓝 10 s (8)流水冲洗 15~30 s (9)0.5%曙红液染色 30~60 s (10)蒸馏水稍洗 2 s (11)80%乙醇 2 s (12)95%乙醇 2 s (13)无水乙醇 2 s (14)石炭酸二甲苯 3 s (15)二甲苯(Ⅰ) 3 s (16)二甲苯(Ⅱ) 3 s (17)中性树胶封固. 注:第(14)步如果不用石炭酸二甲苯,可改用无水乙醇. 染色结果:细胞核蓝色,胞质、肌纤维、胶原纤维和红细胞呈深浅不一的红色. 4.12 切片脱水透明 切片经HE染色后,要彻底脱水透明,才能用中性树胶封盖.如果脱水不彻底,封片后呈白色雾状,镜下观察模糊不清,且容易褪色.切片1-2级无水乙醇脱水,也可使用石碳酸二甲苯进行脱水.石碳酸有较强脱水能力,但长时间可使切片脱色,因此要经过多次二甲苯以使石碳酸完全除去.
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