制作重组DNA时的载体为什么最好要用多个限制性内切酶切点?
来源:学生作业帮 编辑:作业帮 分类:生物作业 时间:2024/05/08 05:39:18
制作重组DNA时的载体为什么最好要用多个限制性内切酶切点?
人教版高三选修本P50 倒数第二段“作为运载体必须有以下条件:……具有多个限制酶切点,以便与外源基因连接……”
只要一个不是就够了吗?或者说是为了方便鸟枪法所以要越多越好?那如果是人工合成的目的基因的载体也是最好要多个吗?那是为什么?
人教版高三选修本P50 倒数第二段“作为运载体必须有以下条件:……具有多个限制酶切点,以便与外源基因连接……”
只要一个不是就够了吗?或者说是为了方便鸟枪法所以要越多越好?那如果是人工合成的目的基因的载体也是最好要多个吗?那是为什么?
5月7日 19:50 限制性核酸内切酶根据其功能可分为一级和二级两大类.在基因重组,基因解析方面广泛使用的是二级,一般情况下识别由4~8个碱基构成的特定序列有选择地将其切断.一级限制性核酸内切酶则跟特定的碱基序列结合,切断位置上不具有特异性.
以典型的二级限制性核酸内切酶EcoRI为例,识别5’-GAATTC-3’这一序列(双链中的另外一条链为3’-CTTAAG-5’)将各链上连接G(鸟嘌呤)和A(腺嘌呤)之间的磷酸二酯键切断生成两个DNA的断片.
由该例子可见,在许多场合,限制性核酸内切酶识别的地方是一个回文序列(palindrome),在这个位置上呈锯齿状切断后给生成断片的末端一个单链部分(叫做附着末端)用同一种限制性核酸内切酶切断的断片的末端是互相吻合的,所以使用连接酶就很容易把这些结合起来.这就是 “剪刀与糨糊”这种说法的由来.
以典型的二级限制性核酸内切酶EcoRI为例,识别5’-GAATTC-3’这一序列(双链中的另外一条链为3’-CTTAAG-5’)将各链上连接G(鸟嘌呤)和A(腺嘌呤)之间的磷酸二酯键切断生成两个DNA的断片.
由该例子可见,在许多场合,限制性核酸内切酶识别的地方是一个回文序列(palindrome),在这个位置上呈锯齿状切断后给生成断片的末端一个单链部分(叫做附着末端)用同一种限制性核酸内切酶切断的断片的末端是互相吻合的,所以使用连接酶就很容易把这些结合起来.这就是 “剪刀与糨糊”这种说法的由来.
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