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不用试剂盒如何纯化DNA?

来源：学生作业帮 编辑：作业帮 分类：生物作业 时间：2024/05/13 00:49:33
不用试剂盒如何纯化DNA?
DNA纯化
首先利用琼胶电泳将不同分子量的DNA片段分开,将某一特定分子量区域的琼胶切下,利用DNA extraction kit将DNA从琼胶中溶出并浓缩.
实验材料
( 6X gel-loading dye:15% Ficoll 400,0.25% bromophenol blue,
0.25% xylene cyanol
( 紫外光箱
( 下列试剂来自GeneAid公司所售的Gel/PCR Fragment Extraction Kit:
* DF Buffer
* Wash Buffer
* Elution Buffer:10mM Tris-HCl(pH8.5)
* DF Column
* 2ml Collection Tube
实验步骤
A.将欲分离之DNA混合物以0.7%琼胶电泳分离.
B.电泳后,将琼胶置於紫外光箱上观察,把含有欲纯化之DNA片段的琼胶部位切下.
C.将步骤B的琼胶以蓝色微量吸管尽可能戳碎.
D.加入500ml DF buffer,55oC作用10分钟,每2-3分钟摇晃数次,直至琼胶完全溶解.
E.将步骤D琼胶溶液全部吸入DF Column,并套上Collection Tube(收集过滤液).
F.8000rpm离心1分钟,将过滤液倒掉.
G.加入500ml Wash Buffer,8000rpm离心1分钟,过滤液倒掉.
H.14000rpm离心2分钟.
I.将DF Column转移至上另一乾净的微量离心管.加入15ml Elution Buffer,室温静置2分钟.
J.14000rpm离心2分钟,微量离心管内之液体即为纯化的DNA片段.
K.取0.5ml纯化的DNA加入4.5mlDDW及1ml 6x DNA loading dye,跑0.7%琼胶电泳,与marker比较,估计DNA的浓度.
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