作业帮pcr结果一半出来一般出不来是为什么?
来源：学生作业帮 编辑：作业帮 分类：综合作业 时间：2024/05/14 17:59:55
pcr结果一半出来一般出不来是为什么?
前几天跑了三次pcr,结果电泳除了marker什么都没有,昨天跑6个样加阴性阳性,可是前4个样品出来,后2个样品和阴性阳性什么都没有,就好像没有放入pcr仪器一样,
体系都是一样的，10ul体系，配好再分装的，期间我也有只用阴性阳性跑过，结果还是比较正常，别人也都能跑，配体系的材料是一样的，配方也一样。但是一要用pcr检测的时候，就会出现这种不知道是什么的情况
前几天跑了三次pcr,结果电泳除了marker什么都没有,昨天跑6个样加阴性阳性,可是前4个样品出来,后2个样品和阴性阳性什么都没有,就好像没有放入pcr仪器一样,
体系都是一样的，10ul体系，配好再分装的，期间我也有只用阴性阳性跑过，结果还是比较正常，别人也都能跑，配体系的材料是一样的，配方也一样。但是一要用pcr检测的时候，就会出现这种不知道是什么的情况
我个人认为,你这个体系太小了.虽然有热盖,但还是会蒸发.只不过蒸气跑不出去.
建议最小是20ul(现在试剂便宜,没必要省那么点钱).再加上机器孔间误差.你自己的加样误差.这样每个孔其实条件并不一样.
而且看你的实验,模板应该是后加是吧,这样的模板量,加得准吗?混匀了吗?
再问： 主要问题是我以前跑了很多次从来没有这样的情况，这两天才这样，所以才苦恼。加了模板以后都是要混匀然后再离心的，还有我是在样品上再加矿物油的，防止蒸发。
再答： 检测一下仪器，配上同一体系的十几支，分别放在上下左右，中间，四周，测试一下，仪器没问题后，看移液器有没问题。微量移液器还与使用手法相关，取上1ul有可能移液器申到液面以下取成3ul是有可能的。看样子试剂 问题不大。 把体系放大一点，这样会分担一点误差的。
建议最小是20ul(现在试剂便宜,没必要省那么点钱).再加上机器孔间误差.你自己的加样误差.这样每个孔其实条件并不一样.
而且看你的实验,模板应该是后加是吧,这样的模板量,加得准吗?混匀了吗?
再问： 主要问题是我以前跑了很多次从来没有这样的情况，这两天才这样，所以才苦恼。加了模板以后都是要混匀然后再离心的，还有我是在样品上再加矿物油的，防止蒸发。
再答： 检测一下仪器，配上同一体系的十几支，分别放在上下左右，中间，四周，测试一下，仪器没问题后，看移液器有没问题。微量移液器还与使用手法相关，取上1ul有可能移液器申到液面以下取成3ul是有可能的。看样子试剂 问题不大。 把体系放大一点，这样会分担一点误差的。