作业帮蛋白提取-癌细胞-怎么提取-已经试过N种方法了,但是都无济于事,
来源：学生作业帮 编辑：作业帮 分类：综合作业 时间：2024/05/14 05:00:15
蛋白提取-癌细胞-怎么提取-已经试过N种方法了,但是都无济于事,
癌细胞用作western杂交试验,可是用裂解液与RIPA的方法都没有用
癌细胞用作western杂交试验,可是用裂解液与RIPA的方法都没有用
同样方法,你用正常细胞提取没有问题吗? WB的参照能显出来?如果是WB没结果,问题不一定是蛋白的提取.
最好是癌细胞和正常细胞同时做,如果还有hela的话,也一起,多一个参照,看是不是操作上的问题.一般动作上细致程度会影响量的多少.也要确定细胞数不能差太远.
此外,最后加PBS或缓冲液溶蛋白时少加一点,又或者是在WB时加大上样量,看是不是量不够；或加长显影时间.
也可以在做完电泳后,做银染直接看看.这个上样量必须足
再问： 谢谢您的回答，正常的细胞这一次没有试过，但是前阶段提细胞就是用的这种方法，提取液上样跑过电泳，能出条带没有问题，提取样品经过超微量分光光度计测得结果是：20mg/ml，用的是RIPA方法，求有没有自己能配的试剂提取癌细胞的，经费不足，买不了试剂盒！！！
再答： 你是电泳有条带，WB没有是吧？ 那就是WB的过程有问题，没转上或转过了（把转后的凝胶染色），二抗结合力不强（加长结合时间和显色时间），洗涤过度（改变时间和次数）等等。其实癌细胞和正常细胞的提取区别是没什么的。 用的都是进口，没配过。 网上查到的像这种，多找几个比较一下http://wenku.baidu.com/view/9a413423192e45361066f56d.html 但是自己配的比不上买来的，污染是一个问题，只能现用现配。 话说你提蛋白时，有加酶抑制剂吧？
再问： 谢谢您不厌其烦的回答； 电泳是没有条带的，用考马斯亮蓝染过； 进口的使用的是什么品牌的？能具体到货号吗？ 然后加蛋白酶抑制剂PMSF了；
再答： 弄错了，是碧云天的，有好几种，你看介绍买吧！因为不知道你的是什么类型的蛋白。http://www.beyotime.com/lysis-buffer.htm
再问： 您好，感觉您推荐的跟我们自己配的差不多啊，除了他们多加了几种蛋白酶抑制剂以外，其他的差不多，您用过吗？我的样品是癌组织。谢谢您
再答： 是啊，癌细胞和纤维细胞都用过。
最好是癌细胞和正常细胞同时做,如果还有hela的话,也一起,多一个参照,看是不是操作上的问题.一般动作上细致程度会影响量的多少.也要确定细胞数不能差太远.
此外,最后加PBS或缓冲液溶蛋白时少加一点,又或者是在WB时加大上样量,看是不是量不够；或加长显影时间.
也可以在做完电泳后,做银染直接看看.这个上样量必须足
再问： 谢谢您的回答，正常的细胞这一次没有试过，但是前阶段提细胞就是用的这种方法，提取液上样跑过电泳，能出条带没有问题，提取样品经过超微量分光光度计测得结果是：20mg/ml，用的是RIPA方法，求有没有自己能配的试剂提取癌细胞的，经费不足，买不了试剂盒！！！
再答： 你是电泳有条带，WB没有是吧？ 那就是WB的过程有问题，没转上或转过了（把转后的凝胶染色），二抗结合力不强（加长结合时间和显色时间），洗涤过度（改变时间和次数）等等。其实癌细胞和正常细胞的提取区别是没什么的。 用的都是进口，没配过。 网上查到的像这种，多找几个比较一下http://wenku.baidu.com/view/9a413423192e45361066f56d.html 但是自己配的比不上买来的，污染是一个问题，只能现用现配。 话说你提蛋白时，有加酶抑制剂吧？
再问： 谢谢您不厌其烦的回答； 电泳是没有条带的，用考马斯亮蓝染过； 进口的使用的是什么品牌的？能具体到货号吗？ 然后加蛋白酶抑制剂PMSF了；
再答： 弄错了，是碧云天的，有好几种，你看介绍买吧！因为不知道你的是什么类型的蛋白。http://www.beyotime.com/lysis-buffer.htm
再问： 您好，感觉您推荐的跟我们自己配的差不多啊，除了他们多加了几种蛋白酶抑制剂以外，其他的差不多，您用过吗？我的样品是癌组织。谢谢您
再答： 是啊，癌细胞和纤维细胞都用过。