作业帮酚氯仿抽提DNA的方法及试剂配法?(蜡块组织） 初次做蜡块组织DNA提取 希望多多指教.方法具体点哦
来源：学生作业帮 编辑：作业帮 分类：生物作业 时间：2024/05/09 20:51:07
酚氯仿抽提DNA的方法及试剂配法?(蜡块组织） 初次做蜡块组织DNA提取 希望多多指教.方法具体点哦
【原 理】
将分散好的真核生物组织、细胞在含SDS和蛋白酶K的溶液中消化分解蛋白质.破坏细胞膜、核膜,SDS可使组织蛋白与DNA分子分离,EDTA能抑制细胞中DNase的活性,使DNA分子完整地以可溶形式存在于溶液中,再用酚、氯仿/异戊醇抽提除去蛋白质,（氯仿可除去DNA溶液中微量酚的污染,异戊醇还可减少蛋白质变性操作过程中产生气泡）得到的DNA溶液经乙醇沉淀进一步纯化,为获得高纯度DNA,操作中常加入RNase除去RNA,此法可获得100~200kb的DNA片段,适用于构建真核基因组文库,Southern blot分析.
【试 剂】
1、组织细胞裂解液
100~200μg/ml 蛋白酶K
10mmol/L Tris－Cl（pH8.0）
0.1mol/L EDTA (pH8.0)
0.5% SDS
20 μg/ml RNase A
2、平衡酚（用0.5mmol/L Tris－Cl饱和,pH8.0）,
3、氯仿/异戊醇（24：1v/v）
4、3mol/L乙酸钠（NaAc,pH5.2）
5、冷无水乙醇（AR）
6、70%乙醇（-20℃静置）
7、TE缓冲液（10mmol/L Tris－Cl、1mol/L EDTA (pH8.0)
将分散好的真核生物组织、细胞在含SDS和蛋白酶K的溶液中消化分解蛋白质.破坏细胞膜、核膜,SDS可使组织蛋白与DNA分子分离,EDTA能抑制细胞中DNase的活性,使DNA分子完整地以可溶形式存在于溶液中,再用酚、氯仿/异戊醇抽提除去蛋白质,（氯仿可除去DNA溶液中微量酚的污染,异戊醇还可减少蛋白质变性操作过程中产生气泡）得到的DNA溶液经乙醇沉淀进一步纯化,为获得高纯度DNA,操作中常加入RNase除去RNA,此法可获得100~200kb的DNA片段,适用于构建真核基因组文库,Southern blot分析.
【试 剂】
1、组织细胞裂解液
100~200μg/ml 蛋白酶K
10mmol/L Tris－Cl（pH8.0）
0.1mol/L EDTA (pH8.0)
0.5% SDS
20 μg/ml RNase A
2、平衡酚（用0.5mmol/L Tris－Cl饱和,pH8.0）,
3、氯仿/异戊醇（24：1v/v）
4、3mol/L乙酸钠（NaAc,pH5.2）
5、冷无水乙醇（AR）
6、70%乙醇（-20℃静置）
7、TE缓冲液（10mmol/L Tris－Cl、1mol/L EDTA (pH8.0)
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