碱裂解法提取的质粒DNA琼脂糖凝胶电泳应该是什么样的?

来源：学生作业帮编辑：作业帮分类：生物作业时间：2024/05/22 06:20:36

一般都有3条带.据推测跑在最前边的是cccDNA（共价闭合环）,中间的是OC（开环）,最后的有点拖带,稍宽,早期多认为是线状的,但后来专家认为断链质粒发生几率很低,形不成条带,因此现在一般认为是处于复制过程中的1.5倍左右的条带.
以上均为推测,每人真的去证明.
但若将质粒提取液单酶切,将会得到整齐的一条带.我实验室经常用这种方法估计质粒的纯度.
再问：老师留了一个思考题：测定实验所提取的质粒DNA的紫外吸收值确定的含量，这个值比实际DNA含量的值偏大还是偏小，why？
再答：偏小。核酸在波长 260 nm处有最高吸收峰，之所以能吸收紫外光，是由嘌呤环和嘧啶环的共轭双键所决定的。依据紫外吸收值大小估计DNA含量是假定核酸分子比较小（数十个bp长度），所以碱基都能吸收紫外光，此时吸光度跟核酸长度（含量）成正比，是一个大概估计值，并不精确。定义1OD 的吸光值相当于50μg / ml 的（短链）dsDNA。质粒由于具有长螺旋结构，使得碱基难以完全暴露在外，导致吸光度相对降低；此外质粒分子大小也远远大于一般合成的线性DNA分子，也会导致吸光度相对降低。所以，采用UV测定所得的质粒浓度（ug/ml）比实际的浓度偏低。
再问：十分感谢。谢谢你。再问个问题：芽孢杆菌，OD600=1 与OD600=2浓度是2倍关系，那所含菌数是什么关系。好像不是2倍关系了。还有怎么确定一定的OD 值所含的菌数。
再答：理论上 OD和菌数呈正相关。但OD测定中的直接测定数值应介于0.2-0.8之间。所谓的OD=2 应该是换算值。如果你测定的直接数据大于1，那么，所测定的OD偏小，直接测定的OD越大，距离真实值越远。

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