作业帮用小剂量质粒提取试剂盒提取质粒前要做什么工作?
来源：学生作业帮 编辑：作业帮 分类：生物作业 时间：2024/05/20 12:05:48
用小剂量质粒提取试剂盒提取质粒前要做什么工作?
提取质粒操作过程：这个是那生产的试剂盒?
1将1～1.5ml过夜培养的细菌液加入1.5ml离心管中.
2于10,000rpm(8,000～10,000×g)离心30s,并弃去上清液.如有需要,可多次重复步骤1、2,以收集更多细菌菌体,但勿过量,以免影响提取质粒的质量.
3加250μl Resuspension Buffer,重悬细菌体沉淀,重悬后应该没有细菌团块.
4加250μl 细胞Lysis buffer,轻柔颠倒4～6次.不要剧烈振动,以防止基因组DNA被剪切.注意不要让反应持续超过5min,
5加350μl Neutralization buffer,立即轻柔颠倒离心管4～6次.溶液应该出现絮状物,但不会出现局部沉淀.
6于13,000rpm(＞14,000×g）离心10min.如离心机转速不够可延长离心时间,直至形成紧密的白色沉淀.
7将步骤6离心后得到的上清液转移到Spin column内,于6,000rpm(≤6,000×g）离心1min,并弃去接液管内液体.
8向Spin column内加650μl Wash Buffer,于12,000g离心30～60s,并弃去接液管内液体.
9重复第8步一次.
10再次于12,000g离心1min,然后将Spin column转移到无菌的1.5ml离心管中.如不进行该步离心,则无法保证离心柱内残液被彻底清除.
11向Spin column内加50μl Elution buffer、去离子水或TE溶液,并于室温静置1min.可根据实验的实际需要决定洗脱液用量.
12于12,000g离心1min,1.5ml离心管内溶液中含有质粒DNA.
提取质粒操作过程：这个是那生产的试剂盒?
1将1～1.5ml过夜培养的细菌液加入1.5ml离心管中.
2于10,000rpm(8,000～10,000×g)离心30s,并弃去上清液.如有需要,可多次重复步骤1、2,以收集更多细菌菌体,但勿过量,以免影响提取质粒的质量.
3加250μl Resuspension Buffer,重悬细菌体沉淀,重悬后应该没有细菌团块.
4加250μl 细胞Lysis buffer,轻柔颠倒4～6次.不要剧烈振动,以防止基因组DNA被剪切.注意不要让反应持续超过5min,
5加350μl Neutralization buffer,立即轻柔颠倒离心管4～6次.溶液应该出现絮状物,但不会出现局部沉淀.
6于13,000rpm(＞14,000×g）离心10min.如离心机转速不够可延长离心时间,直至形成紧密的白色沉淀.
7将步骤6离心后得到的上清液转移到Spin column内,于6,000rpm(≤6,000×g）离心1min,并弃去接液管内液体.
8向Spin column内加650μl Wash Buffer,于12,000g离心30～60s,并弃去接液管内液体.
9重复第8步一次.
10再次于12,000g离心1min,然后将Spin column转移到无菌的1.5ml离心管中.如不进行该步离心,则无法保证离心柱内残液被彻底清除.
11向Spin column内加50μl Elution buffer、去离子水或TE溶液,并于室温静置1min.可根据实验的实际需要决定洗脱液用量.
12于12,000g离心1min,1.5ml离心管内溶液中含有质粒DNA.
各公司的质粒提取试剂盒大同小异,你这个说明书可能是宝生物的试剂盒.
用试剂盒提,准备工作都比较简单：
1,摇菌；
2,准备ddH2O,无菌枪头和离心管；
3,检查溶液1是否加了Rnase,以及wash buffer是否加了无水乙醇；
3,现在天气冷,检查buffer是否有沉淀,有sds的buffer可能有会有析出,提前开水浴锅,温浴,此外,最后一步加TE或水洗脱质粒时,为提高收获量,在离心前,将柱子在50℃水浴2min更好.
若有疑问,欢迎继续讨论,纯属手打,欢迎采纳,祝实验顺利!
用试剂盒提,准备工作都比较简单：
1,摇菌；
2,准备ddH2O,无菌枪头和离心管；
3,检查溶液1是否加了Rnase,以及wash buffer是否加了无水乙醇；
3,现在天气冷,检查buffer是否有沉淀,有sds的buffer可能有会有析出,提前开水浴锅,温浴,此外,最后一步加TE或水洗脱质粒时,为提高收获量,在离心前,将柱子在50℃水浴2min更好.
若有疑问,欢迎继续讨论,纯属手打,欢迎采纳,祝实验顺利!