作业帮关于免疫组化SABC法的一些疑惑?
来源：学生作业帮 编辑：作业帮 分类：生物作业 时间：2024/05/28 16:00:20
关于免疫组化SABC法的一些疑惑?
实验技术是免疫组化SABC法,最近一直在试图彻底弄懂这套技术的整个原理,仍有几点疑惑,望大家能为我指点迷津：
比方说我要做的是对动物A生长抑制素的定位及定量,那么我的简单理解是：用动物A中的生长抑制素（纯抗原）去接种动物B,使其产生单克隆性的一抗（1种效应B淋巴细胞产生的）,再用此单克隆性一抗接种动物C,使其产生相应的多克隆性抗体(此抗体是多种效应B淋巴细胞产生的)(另外就是未用一抗接种动物C时,动物C的血清液可作为封闭液),把二抗和生物素结合上,与二抗结合的生物素再和霉链亲和素结合（霉链亲和素能与4个生物素结合）,霉链亲和素再结合另外三个生物素,另外的三个生物素外连接的是辣根过氧化物酶,最后又辣根过氧化物酶催化二氨基联苯胺（DAB）得棕色沉淀物而显色.
有几点疑惑：
1.这套技术最根本的起点是抗原,那这个抗原一般是在动物组织中哪?比如我认为：生长抑制素可在分泌该物质的细胞的细胞基质中（核膜、细胞膜上不知会不会附着）,组织液中,前者的话,我觉得,这样定位、定量才有意义,就是把原细胞定出来了,若是后者的话有何意义?其它像什么5-HT,NPY等呢?
2.关于未经一抗免疫处理的封闭液血清（和二抗是相同动物的来源）怎么就能封闭掉原抗原动物体内对一抗的非特异性吸附呢?封闭液血清的封闭原理?
实验技术是免疫组化SABC法,最近一直在试图彻底弄懂这套技术的整个原理,仍有几点疑惑,望大家能为我指点迷津：
比方说我要做的是对动物A生长抑制素的定位及定量,那么我的简单理解是：用动物A中的生长抑制素（纯抗原）去接种动物B,使其产生单克隆性的一抗（1种效应B淋巴细胞产生的）,再用此单克隆性一抗接种动物C,使其产生相应的多克隆性抗体(此抗体是多种效应B淋巴细胞产生的)(另外就是未用一抗接种动物C时,动物C的血清液可作为封闭液),把二抗和生物素结合上,与二抗结合的生物素再和霉链亲和素结合（霉链亲和素能与4个生物素结合）,霉链亲和素再结合另外三个生物素,另外的三个生物素外连接的是辣根过氧化物酶,最后又辣根过氧化物酶催化二氨基联苯胺（DAB）得棕色沉淀物而显色.
有几点疑惑：
1.这套技术最根本的起点是抗原,那这个抗原一般是在动物组织中哪?比如我认为：生长抑制素可在分泌该物质的细胞的细胞基质中（核膜、细胞膜上不知会不会附着）,组织液中,前者的话,我觉得,这样定位、定量才有意义,就是把原细胞定出来了,若是后者的话有何意义?其它像什么5-HT,NPY等呢?
2.关于未经一抗免疫处理的封闭液血清（和二抗是相同动物的来源）怎么就能封闭掉原抗原动物体内对一抗的非特异性吸附呢?封闭液血清的封闭原理?
你说的这么多到底是要问啥哦 能简而言之么 那什么抗体的制备过程根本和你没有关系啊 不是什么抗原接种什么乱七八糟的 而是直接把组织拿来做切片 然后在切片上做整个免疫组化过程 不是在动物体内好不好
再问： 我是想弄明白免疫组化这个原理，不是实验那几个简单的步骤，步骤谁都可以照做。 我知道抗体、试剂之类的全都商业化了的，制作过程跟我没关系，我是试图理解整个过程原理！！
再答： 原理就是最简单的抗体抗原免疫反应 没有别的原理了 你说那什么动物ABC的 跟做实验完全没有关系啊 我觉得你是弄错了整个步骤了吧
再问： 我是想弄明白免疫组化这个原理，不是实验那几个简单的步骤，步骤谁都可以照做。 我知道抗体、试剂之类的全都商业化了的，制作过程跟我没关系，我是试图理解整个过程原理！！
再答： 原理就是最简单的抗体抗原免疫反应 没有别的原理了 你说那什么动物ABC的 跟做实验完全没有关系啊 我觉得你是弄错了整个步骤了吧