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刚活化后 提取的质粒（小量试剂盒提取法） 电泳图为什么会出现2、3条带?

来源：学生作业帮 编辑：作业帮 分类：化学作业 时间：2024/05/16 08:21:44
刚活化后 提取的质粒（小量试剂盒提取法） 电泳图为什么会出现2、3条带?
这是中间载体的质粒,马上要酶切 之后链接,之前是因为没有链接成功,所以怀疑是不是提取的质粒有问题,以前没怎么做过,我同学她一直是一条带,我们用的同样的试剂盒.前几次载体和目的片段的质粒同时提取,但是载体质粒浓度较低,回收后条带更低,这次浓度提高了很多,但是出现问题---电泳15分钟出现两条带（较淡）,大的在前约5000（清晰）,小的在后约3800,拍照保存后,继续电泳12分钟,在前两条带的基础上会出现第三条更大的条带较淡.想问一下可否继续酶切 对后续实验有无影响 具体要考虑哪些方面?
这是很正常的,质粒提取过程中或多或少会对质粒本身造成一定的损伤,根据损伤的不同,质粒通常会出现三种不同的构型,分别是双链环状,线性分子（机械损伤造成质粒链完全断开）和单链开环（双链中只有一条链断开,另外一条是闭合的）.而这三种质粒形态在电泳过程中拥有不同的迁移速率,一般双链环状迁移速率最大,其次是线性分子,接着是单链开环.不过这是最通常的三种情况,实际实验过程中可能由于损伤不同而会出现更多不同的条带,这也是为什么质粒提取过程中不能用常规的线性DNA marker 来分析其大小,不过一般都能过做下一步酶切实验.如果楼主要看质粒有没有问题,那么必须得酶切后跑电泳,酶切后的质粒一般只会有一条带,并且电泳能够准确反应其分子量大小.酶切之前的质粒电泳结果要多不准有多不准.
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