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关于蛋白质变性的问题1mL5%卵清蛋白溶液,加1mL95%乙醇,再加PH4.7的缓冲溶液,后加水8mL,再加0.1NHC

来源:学生作业帮 编辑:作业帮 分类:化学作业 时间:2024/05/24 20:36:59
关于蛋白质变性的问题
1mL5%卵清蛋白溶液,加1mL95%乙醇,再加PH4.7的缓冲溶液,后加水8mL,再加0.1NHCL数滴,沉淀溶解,为什么?
1mL5%卵清蛋白溶液,加1mL0.1NNaOH,95%乙醇1mL,后加一滴甲基红,再加0.1N醋酸后加0.1NHCl数滴,沉淀溶解,为什么?
1mL5%卵清蛋白溶液,加1mLNHCl,1mL95%乙醇,后加一滴甲基红,再加0.1NNa2CO3后加0.1NHCl数滴,沉淀溶解,为什么?
1.有机溶剂助沉法 + 等电点法沉淀蛋白.乙醇有机溶剂变性蛋白 PH4.7的缓冲溶液更加沉淀蛋白.(卵清蛋白的等电点pI是4.6-4.7)当你加入HCL时,pH降低了,远离等电点,因此蛋白溶解了.
2.NaOH 加入后,一定远离pI,无沉淀.乙醇作用同1.此时加碱 一定呈现黄色.醋酸/醋酸盐缓冲溶液的pH=pka =4.757,因此加入醋酸后达到pI,蛋白沉淀.0.1NHCl数滴,体系pH远离等电点,沉淀溶解.甲基红是pH指示剂,变色范围是pH4.2(红)--6.2(黄),可以指示你2头都是溶解的,只有在橙色(pI 4.7左右)时沉淀.
3.(氯化铵)盐析 加 有机溶剂助沉 在一定浓度NH4Cl饱和度下,蛋白沉淀了,NaHCO3缓冲范围 9.1-10,因此,加入盐酸后,pH远离pI,盐析出来的蛋白被破坏了离子结构,溶解了.甲基红指示剂,蛋白溶解时,溶液为黄色,即便加酸HCl 也不能超过橙色.(其实这里 不加最后的盐酸 蛋白也会溶解)