PI染色后细胞量减少我做细胞分散后PI染色荧光显微镜观察,细胞分散后细胞的量还可以,但是经过固定,洗,PI染色,再洗之后
来源:学生作业帮 编辑:作业帮 分类:生物作业 时间:2024/04/28 11:57:17
PI染色后细胞量减少
我做细胞分散后PI染色荧光显微镜观察,细胞分散后细胞的量还可以,但是经过固定,洗,PI染色,再洗之后只有极少的细胞,激发后还没有荧光.请问有经验的高手,PI染色过程需要注意哪些问题?
我做细胞分散后PI染色荧光显微镜观察,细胞分散后细胞的量还可以,但是经过固定,洗,PI染色,再洗之后只有极少的细胞,激发后还没有荧光.请问有经验的高手,PI染色过程需要注意哪些问题?
博凌科为 主要是离心,去液的问题.我以前做的本科毕业设计就是比较三种荧光探针的性能,PI是个标准的对照. 细胞分散后放入离心管,我做的时候是1200r/min,然后倒掉再加PBS洗.这个倒液很重要,一定要一次到干净,而且要快,千万不要因为管底有一点液体而再到一次,这样会损失大量细胞.剩余的一点培养基会在之后再洗两遍的时候洗掉的.有时细胞数量不太多时也是同样的操作,不用怀疑,细胞肯定有. 之后的乙醇固定后细胞死亡,到的时候要缓一点,但同样不要回流后再倒.死细胞间的结合能力弱,太快倒掉会全流出去的. 我当时是在加了PI后洗一遍,一个小时后去做的流式,效果基本都很好的. 楼主,这个实验主要是离心,倒液,动作大胆一些,快一些效果会更好,否则时间太久了影响效果.对了,还有就是若剩的液体太多,就多离一次心,一般损失是可以接受的.PI染色后要在30min内去检荧光,要不会衰减的. 希望我的回答对你有帮助,祝实验顺利!
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