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实验中测蛋白的方法有很多,像western 免疫组化 放免,在想要什么样的指标的时候选择什么方法,请指教

来源：学生作业帮 编辑：作业帮 分类：生物作业 时间：2024/05/05 14:14:50
实验中测蛋白的方法有很多,像western 免疫组化 放免,在想要什么样的指标的时候选择什么方法,请指教
就是 我明白 具体每个方法 可以得到什么样的指标 ,如果有时间可不可以一起解释一下rt-PCR和印迹杂交 测mRNA ,这两个方法的选择,
western测细胞培养中的细胞株蛋白较为多用,而免疫组化主要用于组织切片,放免我没有做过,不过有所耳闻,与ELISA的用途差不多一致,主要是测定溶液当中的蛋白质浓度.放免貌似灵敏度比ELISA高很多,但由于放射性的危险性,在ELISA能够检测到的情况下一般还是选用ELISA.
Western跟免疫组化相比,能够半定量地在不同样本之间比较,这一点的话在免疫组化当中,必须差别较大才能够判断结果,免疫组化在测试表达水平的方面很不灵敏.但是免疫组化也能够提供western所不能的一些信息,比如阳性细胞在组织中的分布,甚至目标蛋白在细胞当中的分布.这两种方法的最重大差别是,western告诉你体外,免疫组化告诉你体内,western告诉你量,免疫组化告诉你分布.
RT-PCR和Northen blot都是测mRNA,但Northen近年貌似很少人用了,一大原因可能是它没有扩增的步骤,灵敏度很低,本身表达不多的mRNA片断不容易测到,再来RNA超爱降解,RT-PCR把它逆转录为cDNA,解决了这一问题,而Northen就仍然为此所苦.此外还听说Northen用到的对人体有害的试剂较多,也造成研究人员不愿选用.
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