作业帮谁能告诉我一下细胞的透射电镜的制作步骤?
来源：学生作业帮 编辑：作业帮 分类：生物作业 时间：2024/04/29 11:14:22
谁能告诉我一下细胞的透射电镜的制作步骤?
我要作细胞的透射电镜样本,谁能告诉我一下详细的步骤,谢谢!
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透射电镜标本制备方法
由于电镜电子束穿透能力的限制,必须把标本切成厚度小于0.1um以下的薄片才适用,这种薄片称为超薄切片.常用的超薄切片厚度是50-70nm.
在透射电镜的样品制备方法中,超薄切片技术是最基本、最常用的制备技术.超薄切片的制作过程基本上和石蜡切片相似,需要经过取材、固定、脱水、浸透、包埋聚合、切片及染色等步骤.
一 取材的基本要求
组织从生物活体取下以后,如果不立即进行适当处理,会由于细胞内部各种酶的作用,出现细胞自溶现象.此外,还可能由于污染,微生物在组织内繁殖使细胞的微细结构遭受破坏.因此,为了使细胞结构尽可能保持生前状态,必须做到快、小、准、冷：
(1)．动作迅速,组织从活体取下后应在最短时间内 (争取在1分钟内) 投入2.5%戊二醛固定液.
(2)．所取组织的体积要小,一般不超过1mm×1mm×1mm.也可将组织修成1mm×1mm×2mm大小长条形.因为固定剂的渗透能力较弱,组织块如果太大,块的内部将不能得到良好的固定.
(3)．机械损伤要小,解剖器械应锋利,操作宜轻,避免牵拉、挫伤与挤压.
(4)．操作最好在低温(0℃～4℃)下进行,以降低酶的活性,防止细胞自溶.
(5)．取材部位要准确.
取材方法：将取出的组织放在洁净的蜡版上,滴一滴预冷的固定液,用两片新的、锋利的刀片成“拉锯式”将组织切下并修小,然后用牙签或镊子将组织块移至盛有冷的固定液的小瓶中.如果组织带有较多的血液和组织液,应先用固定液洗几遍,然后再切成小块固定.
由于电镜电子束穿透能力的限制,必须把标本切成厚度小于0.1um以下的薄片才适用,这种薄片称为超薄切片.常用的超薄切片厚度是50-70nm.
在透射电镜的样品制备方法中,超薄切片技术是最基本、最常用的制备技术.超薄切片的制作过程基本上和石蜡切片相似,需要经过取材、固定、脱水、浸透、包埋聚合、切片及染色等步骤.
一 取材的基本要求
组织从生物活体取下以后,如果不立即进行适当处理,会由于细胞内部各种酶的作用,出现细胞自溶现象.此外,还可能由于污染,微生物在组织内繁殖使细胞的微细结构遭受破坏.因此,为了使细胞结构尽可能保持生前状态,必须做到快、小、准、冷：
(1)．动作迅速,组织从活体取下后应在最短时间内 (争取在1分钟内) 投入2.5%戊二醛固定液.
(2)．所取组织的体积要小,一般不超过1mm×1mm×1mm.也可将组织修成1mm×1mm×2mm大小长条形.因为固定剂的渗透能力较弱,组织块如果太大,块的内部将不能得到良好的固定.
(3)．机械损伤要小,解剖器械应锋利,操作宜轻,避免牵拉、挫伤与挤压.
(4)．操作最好在低温(0℃～4℃)下进行,以降低酶的活性,防止细胞自溶.
(5)．取材部位要准确.
取材方法：将取出的组织放在洁净的蜡版上,滴一滴预冷的固定液,用两片新的、锋利的刀片成“拉锯式”将组织切下并修小,然后用牙签或镊子将组织块移至盛有冷的固定液的小瓶中.如果组织带有较多的血液和组织液,应先用固定液洗几遍,然后再切成小块固定.