作业帮 > 生物 > 作业

如何构建RNA干扰载体?

来源：学生作业帮 编辑：作业帮 分类：生物作业 时间：2024/05/04 16:01:26
如何构建RNA干扰载体?
另外简短的解释下正义表达载体和反义表达载体的意思
在RNA干扰实验中
首先需要构建dsRNA表达载体
将这种载体导入受体细胞中后
表达产生的dsRNA在DICER酶作用下形成siRNA
引起具有相同序列的mRNA发生讲解
导致细胞或个体不能合成相应的蛋白质
所以个体会表现出功能缺失表型
构建表达载体通常选用dsRNA
需要注意的一些方面是
dsRNA序列中GC的含量要小于50%
高GC含量会降低RNAi的效果
选定的dsRNA序列应通过搜索数据库确保与其他基因无同源性
以避免对其他同源性基因表达的抑制
不同区域的dsRNA具有不同的基因沉默效果
可同时构建两个以上针对同一基因不同靶区域的dsRNA表达载体
还要充分考虑siRNA的结构特征
siRNA与mRNA的同源程度对RNAi有明显影响
启动子区或者编码区与siRNA同源的基因受siRNA抑制
但siRNA在动物细胞中对mRNA的前体没有影响
所以含非编码区序列的dsRNA不会引起RNAi
而且在构建表达载体时
经常使用U6启动子等RNA聚合酶Ⅲ能够识别的启动子序列
最后将其转入到质粒中
这里说的只是一个简单的过程
总的来说构建表达载体是个比较复杂的过程
如果要知道详细的技术
建议还是去看书吧
这里是说不清的
推荐一本书
上面什么都有
正反义表达载体就是把目的基因正向或者反向插入到质粒中再转染
质粒中含有正向插入目的基因的就是正义表达载体
含有反向插入的就是反义表达载体
基因工程中的逆转录病毒做载体时,逆转录病毒是RNA病毒,如何与目的基因结合?构建表达载体? 转基因过程中如何构建载体啊 急,如何构建原核表达载体 如何构建某一个基因的原核表达载体 载体构建系列疑问..、. RNA干扰的原理? 什么是RNA干扰技术 核糖核酸(RNA)干扰机制 RNA干扰技术 RNA干扰现象? 构建RNA干涉载体时,正反向目的片段中间插入的内含子有何要求? RNA是不是遗传信息载体