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用氯化钙法将质粒DNA转化入大肠杆菌实验中,转化成功的关键因素有哪些?

来源:学生作业帮 编辑:作业帮 分类:生物作业 时间:2024/05/24 08:36:53
用氯化钙法将质粒DNA转化入大肠杆菌实验中,转化成功的关键因素有哪些?
1.细菌的生长状态和密度:OD006=0.0.5 细菌出于对数期或者对数前期
2.质粒DNA:数量:质粒DNA不超过感受态细胞体积的5%
大小:分子量越大转化效率越低,超过30Kb的质粒DNA很难转化成功
构型:超螺旋的DNA具有较高的转化效率,重组DNA效率低一些,环状DNA相比线性DNA转化效率高一些
3.所用试剂纯度、质量、器皿的洁净程度
4.防止杂菌和其他外源DNA的污染