质粒和感受态大肠杆菌的不兼容

1.你到底是感受态没制备好呢?还是转化了,但平板上没克隆呢?2.你转一个有人转成功过的试试,排除感受态和你自己操作是不是有问题?3.你用的是哪种菌啊?LBA4404?GV3101?3抗有没有+错啊?4

若感受态细胞要保存备用,液氮保存最好,其次一70℃,添加20％甘油利于冷冻保存,但添加保护剂对转化率有抑制作用.

孙小刀3个月前觉得大肠杆菌感受态细胞的制备实验简单一般实验室喜欢一下制备大量感受态储备.所以工作量比较大,制作过程到处都有,大多数人也是用化学法做.注意无菌,低温等试验环境,最主要是耐心.

大肠杆菌感受态细胞的制备(CaCl2法)(1)从新活化的E.coliDH5α菌平板上挑取一单菌落,接种于3～5mlLB液体培养中,37℃振荡培养12h左右,直至对数生长期.将该菌悬液以1:100～1:

不能!感受态是改变了膜的通透性,当你去除氯化钙或者其他刺激之后细胞就复原了.

1、“切开的质粒”等于“线性DNA”.2、“线性DNA转化细菌、以及真菌的原生质体”已经成功.所以,切开的质粒能转化进入感受态细菌.但是,不能复制.如果质粒上带有与细菌染色体上同源序列,质粒可以重组交

因为这时候抗抗生素的基因还没有表达出产物,加入抗生素会把细胞杀死.不过青霉素是个例外,因为青霉素只是阻止细菌细胞壁的合成,而不是直接杀死细胞,所以它只是抑制增殖,细胞还可以存活,然后表达抗青霉素基因,

感受态大肠杆菌是指受Cacl2或电击处理,非常容易吸入附在大肠杆菌细胞表面的外源DNA的一种特定形态,常用于基因工程不是一种大肠杆菌,而是大肠杆菌在特定情况下的特定状态

冰浴过程中,原来加在溶液中的钙离子和细菌细胞膜结合,在低温下形成液晶结构,这样,在42度热激下,这种液晶结构收缩,将细胞膜扯开孔道,使DNA进入细菌细胞中.这就是原理.前面冰浴不清楚,热激我认为是让已

问题描述不清.“同时做对照：质粒酶切回收的产物电转”?也就是说拿线性的质粒去电转做对照?如果是这样,你不如用感受态细胞直接做阴性对照,再用原质粒转化做阳性对照,这样更好分析结果.多克隆位点是很小一段,

这属于专业问题啦下面的简单方案是Clhen等(1972)所用方法的变通方案,常用于成批制备感受态细菌,这些细菌可使每微克螺旋质粒DNA产生5x106-2x107个转化菌落,这样的转化效率足以满足所有在

大肠杆菌的基因组包括两个部分：大肠杆菌染色体DNA基因组+质粒DNA基因组还不懂,就跟我聊天是菌体的一种命名方式,这个东西不用管它

大肠杆菌的天然质粒有ColE1、RSF2124、pSC101.第一个质粒有大肠杆菌素E1合成基因；第二个是第一个的派生质粒,带有一个编码氨苄青霉素抗性基因的转位子；第三个有四环素抗性基因（手机字母不好

氯化钙的确能提高转化效率质粒DNA和细胞壁表面的粘多糖都带负电荷,而二价的钙离子能促进两者的黏着,因此可以提高转化效率

要看你做的是什么了.大肠杆菌感受态根据用处的不同,也有很多种类,比如比较常见的TOP10、DH5α,质粒保存较为稳定的JM109、STBL3,表达所用的BL21等等.除此之外,植物基因转化常用土壤农杆

冰浴是为了质粒附着在菌体表面,热击是打开通道让质粒进入,觉得LZ的做法影响不大,不过要实际验证

菌种保存采用甘油种结合超低温（-70℃）保存的方法,即用无菌甘油悬浮工程菌,并使甘油终浓度为30%（V/V）,所获物即为工程菌的甘油种.低温可使工程菌的生命活动处于非活跃状态而能较长时间保存细胞活力、

1.感受态细胞没有制备好2.重组子整个就没有导入进细胞里再问：还有没有其他原因。。。。不够多~谢谢哈就算是重组子没有进入细胞内，那也应该还有白班，可是我的是什么颜色都没有再答：质粒上的抗生素抗性，没有

所谓的转化是将外源DNA分子引入受体细胞,使之获得新的遗传性状的一种手段,它是微生物遗传、分子遗传、基因工程等研究领域的基本实验技术.在自然条件下,很多质粒都可通过细菌接合作用转移到新的宿主内,但在人

对照组被污染了,或者氨苄有问题,或者在配制培养基的时候在培养基还没冷却的时候就加了氨苄.其实大肠杆菌感受态可以买的,又不贵.自己做太麻烦了.我已经说了啊,可能是对照的大肠杆菌被污染了,或者这些大肠杆菌