作业帮GST融合蛋白形成包含体不溶
来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/05/11 03:16:37
gst融合蛋白是将谷胱甘肽S转移酶（glutathioneS-transferase）与目标蛋白做成融合蛋白的方式在外源表达His-tag融合蛋白是六个连续组氨酸标签与目标蛋白做成融合蛋白的方式在外源
请给出相关的参考书籍!用GST标签把X蛋白结合到层析柱上,血清用这个柱子亲和层析.
离心完之后,包涵体的密度最大,沉在最底下,不溶蛋白密度稍小一些,在包涵体上层.绝对区分是不可能的,提包涵体的时候都会有一些杂蛋白提出来,有些就是不溶蛋白再答：离心之后把沉淀提取出来溶解后跑SDS-PA
GST标签太大了,HIS小,但是估计没GST好纯化,我用的是HIS标签,结果,总有两个杂蛋白去不掉,挺郁闷,上AKATA效果也不怎么好如果多个大个的GST不影响你蛋白活性的话,那GST吧.
这里有,http://hi.baidu.com/xujunguo/blog/item/f8fd6bdd2fb82e3c5882dd80.html
如果只要蛋白,不需要GSTTag,就挂柱子,用凝血酶把蛋白切下来.如果需要tag,可以用分子筛分离.
因为虽说GST适合于可溶分泌性蛋白的纯化,但是有些蛋白是包涵体形式的,你必须要保留沉淀,细胞破碎后收集蛋白,再做蛋白复性然后纯化.即使是分泌性蛋白,也可保留沉淀当做对照,检测蛋白残留量等
用GST标签把X蛋白结合到层析柱上,血清用这个柱子亲和层析.
GST标签可以增加可溶性,同时避免目的蛋白降解
在结合液中加入低浓度的非离子型去污试剂,可以减少非特异性背景
用融合蛋白的tag做WesternBlotting,或者纯化后看融合蛋白的大小和预计的比较
优点：可以方便检测及分离纯化；缺点：可能影响到原蛋白的结构而破坏它天然的功能,或赋予其新的功能.具体的要看你和什么标签融合.
首先找一种正常的标签蛋白进行一下纯化试验,如果能够纯化出来那就是你的蛋白的问题,可能是蛋白在表达的时候非正常折叠,标签被折叠在内部,没有在蛋白表面游离着,这样的话当然不会被镍柱捕获了.比较严重的情况就
为什么6X组氨酸与ATG中间有14个碱基?不是3的倍数?悲剧了.再问：是表达不会有his标签还是肯本就不能表达？再答：标签应该能表达出来，不过后面的序列全乱了，移码了，肯定不能用了
GST单抗,又叫GST单克隆抗体,或谷胱甘肽S转移酶单克隆抗体,是指能够识别GST的单克隆抗体,目前市场上的GST单抗主要有GST鼠单抗和GST兔单抗.2GST鼠单抗编辑通过传统单抗制备方法得到的能识
基因的分子量还是标签蛋白的分子量呢?再问：基因的分子量再答：基因的分子量还是基因的长度，如果说是基因的分子量那就纠结了。再问：哦，应该是长度，不好意思啊再答：只记得表达出来的蛋白是26kDa，基因长度
是进入空气引起的吗?那会影响柱效,你的洗脱峰的峰型可能有变化
中文名称：融合蛋白英文名称：fusionprotein定义1：融合基因的表达产物,或通过生物学和化学方法融合的两个或两个以上蛋白质.应用学科：免疫学（一级学科）；应用免疫（二级学科）；免疫学检测和诊断
做个对比实验用不加不加目的蛋白多角体蛋白做个指纹然后一差减得到的就是目的蛋白的指纹