作业帮gapdh内参引物
来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/05/11 00:37:19
引物加的量应该相同,能放在一管里跑最好,但是分开跑也可以接收（一般都是这样）
上下引物的Tm最好相似,不能差异太大,不然不好设计退火温度；内参条带很亮,说明RT应该没多大问题,问题可能出现在PCR上.没有目的基因是因为1该基因确实不表达；2你的引物不特意,到NCBI的Prime
在这个专利文件里面有全长,引物你自己设计吧
呃,难道你不会设计引物?获取基因不需要用内参.内参是做表达分析时才用的.比如你做RT-PCR考察不同组织中HintI表达差异时才需要用内参的.
你先要逆转录mRNA成cDNA,然后再扩增.你上NCBI查到hint1的cDNA序列,按照5’UTR和3’UTR序列设计就可以了啊.
一般认为一些持家基因的表达量在不同状态下变化不大,所以可以认为它们表达是恒定的,故而用来做内参简而言之,就是你有两个样品（譬如不同生长条件或者不同组织的）,要比较其中某基因A表达转录变化,就分别比较两
是的,你需要用等量体系分别用每对引物进行PCR.实际操作时,我们要求至少3份biologicreplica,用来检测你所测到的表达变化确实是因为实验组与对照组之间的差别.同时这3份biologicre
啥都没有的话是无法设计的首先你可以克隆获得内参的序列,再进行下一步实验再问：如果是想用18srRNA这个内参，我该怎么设计引物来得到这段序列呢？再答：这个在各个物种中的同源性很高的，你可以直接用其他物
可以鉴定出两种状态下细胞总RNA样品内A基因量的差异,但这个差异包含着误差：1,总RNA量的不准确性,虽然用分光光度计计算了浓度,但实际上还是有误差的存在,对那些表达水平只差那么丁点儿的样品尤其关键；
要回答这个问题必须看你引物的序列.你贴出来我帮你查一下,你自己也可以BLAST一下.如果在人和鼠的基因中都可以BLAST到,则可以用,否则就不可以.虽然这些HouseKeeper基因的同源性很高,如果
这是由你设计的引物决定,一般控制在200bp以下为佳.包括你要检测的目的基因,设计的片段长度也控制在200bp以内.保证扩增效率较为一致.
我知道和使用过的U6内参基因只有两个：RNU6-1和RNU6-2.前一个就是常见的u6,后一个有时被称为u6b.在我的大鼠RNA样本当中,u6表达量有些太高,u6b的Cq值与我的目标miRNA比较接近
那是内参引物可能有问题,建议重新设计内参引物
`````````````````````分给我吧,别浪费了
这个概念一般是用在定量PCR中.定量PCR是要检测某个基因的表达,降低或者提高,但是当你得出结果以后,你并不知道是它本身的表达降低/提高了,还是你操作过程中造成的误差（比如提RNA时的损失）,所以这个
看来是做RT-PCR的,PCR是聚合酶链式反应,也就是体外特异性扩增DNA片段,是所有PCR技术的基础；RT-PCR有2种理解,即反转录RCR（reversetranscriptionPCR,以RNA
做定量PCR中用到的是一段表达量比较稳定的基因一般作为对照就是说您在做RT-PCR事为了去除不同标准本再RNA得产量,质量,以及逆转录效率上可能纯在的差别而获得目标基因特异性表达的真正差异,通常选择内
我不了解你的实际情况,我给你几条建议：1.可能是内参引物有问题2.你扩增内参基因的PCR条件设计可能有问题,如Tm3.你用的是一块胶吗?加核酸染料了吗?