作业帮标签融合蛋白 mRNA 表达 检测不到蛋白
来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/05/11 20:02:00
我利用盐酸胍裂解了融合表达的包涵体蛋白然后亲和纯化,现在想要脱盐处理,不但有的蛋白质（如血红蛋白、肌红蛋白、清蛋白）在较高的温度（25度）比0
可以,我做过的,很可靠,关键是你的GFP要正确表达,抗体要有效检测到的目的蛋白比不融合时大大约25KD左右
ArecombinantproteincanbetaggedN-terminallyorC-ternimallywitha6XHistag.Thistagisbetterinprokaryoticsy
如果只要蛋白,不需要GSTTag,就挂柱子,用凝血酶把蛋白切下来.如果需要tag,可以用分子筛分离.
我觉得这应该是转录后水平调控的,在转录后通过对肽链进行加工修饰后合成了这种蛋白.
当然可以只要你包被的抗原可以与目的蛋白反应就行再用蛋白免疫一种实验动物得到抗体作为结合酶标二抗的底物这样就完成了一个夹心ELISA
有很多种方法,以下列举几种：1,蛋白磷酸酶活力检测（kinaseactivityassay）2,利用专一的磷酸根抗体（phospho-specificantibody）3,西方墨点法或蛋白质印渍法（W
看你的flag抗体是否有问题,我是做抗体生产的,原来开发flag抗体时就会对其进行C端、N端、M端的Qc检测,正常情况下三端都需要有识别,我担心你的抗flag抗体有可能不识别N端,还有一种可能就是你的
用GST标签把X蛋白结合到层析柱上,血清用这个柱子亲和层析.
后者比较好,因为特异性强.SDS-PAGE是检测所有的蛋白,有可能你看见的一个条带不止一种蛋白（相同片段的多种蛋白）.
用融合蛋白的tag做WesternBlotting,或者纯化后看融合蛋白的大小和预计的比较
优点：可以方便检测及分离纯化；缺点：可能影响到原蛋白的结构而破坏它天然的功能,或赋予其新的功能.具体的要看你和什么标签融合.
为什么6X组氨酸与ATG中间有14个碱基?不是3的倍数?悲剧了.再问：是表达不会有his标签还是肯本就不能表达？再答：标签应该能表达出来，不过后面的序列全乱了，移码了，肯定不能用了
基因的表达是DNA-RNA-蛋白,期间有转录水平调控、转录后调控、翻译后调控等多种调控机制影响该基因的表达.所以蛋白水平高低的原因就可能是多方面的.蛋白表达多,可能是mRNA多,也可能mRNA变化不大
这是有可能的,因为mRNA半衰期是不一样的,有的存货时间短,有的很长；还有上面回答提到的多核糖体也是影响因素.
GST单抗,又叫GST单克隆抗体,或谷胱甘肽S转移酶单克隆抗体,是指能够识别GST的单克隆抗体,目前市场上的GST单抗主要有GST鼠单抗和GST兔单抗.2GST鼠单抗编辑通过传统单抗制备方法得到的能识
his标签蛋白就是：六个组氨酸.一般存在于重组蛋白氮端或碳端,便于纯化该重组蛋白,组氨酸可以特异性的结合镍离子,带有组氨酸标签的重组蛋白可以被镍柱吸附,从而达到纯化的目的.也就是在表达载体上面,特别加
做个对比实验用不加不加目的蛋白多角体蛋白做个指纹然后一差减得到的就是目的蛋白的指纹