作业帮扩增条带长度
来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/05/16 15:15:34
1.先看下PCR电泳图里杂带多不多,若有的话很可能非特异性扩增了2.若条带干净,仍然有可能存在非特异性扩增,引物特异性不高导致竞争结合可将DNA直接酶切看是否能切出你的目标片段3.序列比对结果不能只看
这个很正常,引物本身的结构和模板的结合牢固程度,就会影响扩增的效率,导致扩增出来的片段亮度不同.
可能有很多原因,最常见的原因是1.模板不干净,2.引物设计不当,3.退火温度过高,等等
第一：你这个胶跑的时间太久了!第二：你这个模板加的太多了!第三：你这个酶加的太多!第四：你的模板可能纯度不高如果以上问题都解决了还是没有改变,你可以考虑重新设计合成引物了再问：谢谢您，我排除时间一下时
做个对照,如果酶没有问题的话.那可以降低一下退火温度或者稍微提高一下模板量再试试.
非特异性扩增优化下pcr条件在不行的话就重新设计引物
为什么只有10个碱基配对呢?引物总长多少?再问：加上3bp保护碱基和9bp酶切位点。总长19bp再答：晕死，这么短，一般引物都是18-20bp，再加上保护碱基和酶切位点好吧再问：好吧。谢谢你啊！又合成
我也遇到过类似的问题,根据同源性设的引物来PCR,结果出来的是非特异条带,要不就是没有.还是得优化条件比如引物和模板的比例
原因很多,你是否提到了DNA,可以将你跑的DNA直接跑胶看看,到底有没有条带；PCR扩增的程序有没有问题,或者引物是否有问题,可以找个对照DNA试试,相同扩增条件下,是否扩出条带,如果扩不出来就用可能
一般是不要切胶,直接把第一次的PCR产物取一微升作为底物,再用第二队引物扩增一次,如果引物设计正确,就只会出现一条条带了.如果要计算大小,就按楼上说的.但是雀式pcr的目的就是至少做2次,以保证特异性
用dl2000marker的话,在750bp（从上往下第三条带）和1000bp（第四条带）之间,
你给的条件非常模糊,无法判断.因为PCR的反应条件与很多参数有关系.如模板浓度,引物长度及GC含量,引物浓度,dNTPs浓度,选用的taqenzyme,缓冲液的离子含量,产物大小,变性时间,退火温度及
PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备,②引物的质量与特异性,③酶的质量及,④PCR循环条件.寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究. 模板：①模板中含有杂蛋白质,②模板中含有Taq酶抑制剂,③模板中
可能是里面有带抗性的质粒,但是这个质粒上并没有插入你要的片段哦
PCR产物测序的最大风险是有在凝胶上看起来的一个条带,实际上有多个分子.也就是说长度相似的分子有可能在电泳的时候只有一条带.如果只是进行PCR产物回收,没有进行凝胶分离的过程的话,东西可能更多了.问题
这要具体分析.一种可能是你的PCR产物是非特异性片段,所以长度不一,这可以通过和你预期PCR产物的长度进行比较来判断.另一种可能是该基因在不同情况下有不同的剪接模式（alternativesplici
很宽极有可能是扩增出两个或多个大小相近的片段,这种片段测序结果往往都是乱封,是多个序列测序结果叠加在一起的.解决办法,更换特异引物,或者胶浓度加大,比如2%的.电泳时间久一些,比如40分钟,就有可能将
没P出来呗.引物不对还是PCR体系有问题,自己好好在试试.P的时候模板加了多少啊?换个引物试试.要不就是模板有问题,PCR这东西,不稳定因素老多了.好好反思一下.
如果引物序列,PCR体系,程序,以及所用的物种都和文献一样的话,可考虑两种情况：1.你所参考的文献真实度有待考量.2.你所提取的该物种DNA质量不好.需重新提纯.
1退火温度不合适2引物不合适3模板有问题4酶由问题